[发明专利]一种双波长微生物生化反应动态判读检测方法

说明书

本发明公开了一种双波长微生物生化反应动态判读检测方法。该方法对微生物生化鉴定试验孔的吸光度采用双波长进行动态实时检测，分段拟合双波长吸光度的比值后，通过求曲线的速率和加速度，可预判反应孔的阴阳性，进而快速鉴定细菌种属，所述预判反应孔阴阳性的方法为：求双波长吸光度的比值，分段滚动拟合其曲线，求其速率或加速度，阳性单调递增(递减)，阴性基本不变或单调递减(递增)。本发明的方法特别适用于颜色和浊度同时变化的微生物生化反应，通过动态监测反应孔中浊度和颜色的综合变化，分段拟合双波长吸光度的比值，求出曲线的速率或加速度，可准确提前预判鉴定试验孔的阴阳性，可实现细菌的快速鉴定。

技术领域

本发明涉及微生物鉴定领域，具体是涉及一种双波长微生物生化反应动态判读检测方法。

背景技术

微生物鉴定能为感染性疾病提供重要诊疗依据，使患者能得到及时有效的治疗。细菌鉴定是指将未知细菌按生物学特征放入系统中某一适当位置和已知菌种比较其相似性，并通过对比分析方法确定细菌分类地位的过程。细菌鉴定方法包括生化鉴定、核酸检测、血清学鉴定、自动化仪器鉴定及质谱技术等。其中生化学鉴定是细菌鉴定中最重要的一种，主要是依据细菌对营养物质分解能力的不同及其代谢产物的差异对细菌进行鉴定，包括蛋白质分解产物试验、糖分解产物试验、触酶试验、氧化酶试验、凝固酶试验等。

生化学鉴定也是目前商品化鉴定卡中最主要的鉴定方法，这种方法会通过上述各种试验，使培养基中的颜色、浊度、或底物颜色等发生变化，目前鉴定仪主要通过透射法监测反应孔中的颜色或浊度的变化，鉴别出细菌种属。

然而，目前透射法存在对颜色和浊度同时变化的反应孔的阴阳性难以判读的问题。微生物生化鉴定试验a、无色变黄色的试验，例如β半乳糖苷酶试验；b、无色变棕色的试验，例如对硝基苯丙氨酸脱羧酶试验，c、绿色变蓝色或黄色，例如使用溴百里酚蓝作为指示剂的麦芽糖发酵试验，d、黄色变红色的试验，例如使用酚红作为指示剂的精氨酸脱羧酶试验。颜色变化的同时，浊度也发生了很大的变化，因此，采用单波长透射检测法，很容易出现假阴或假阳问题。

另外，目前大部份微生物鉴定采用终点判读法，即微生物在35℃左右的恒温环境长时间培养，待生化鉴定反应孔中的试验充分反应后，仪器才能分析鉴定微生物种属并报告结果，鉴定速度也不能满足目前市场需求。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述背景技术的不足，提供了一种双波长微生物生化反应动态判读检测方法。

为实现本发明的目的，本发明所述双波长微生物生化反应判读检测方法对微生物生化鉴定试验孔的吸光度采用双波长进行动态实时检测，分段拟合双波长吸光度的比值后，通过求曲线的速率和加速度，可预判反应孔的阴阳性，进而快速鉴定细菌种属。

进一步的，所述动态实时检测中，数据采集周期为15～30分钟。

进一步的，所述预判反应孔阴阳性的方法为：求双波长吸光度的比值，按2～10个点，例如3～7个点，又如5个点分段滚动拟合其曲线，求其速率或加速度，阳性单调递增(递减)，阴性基本不变或单调递减(递增)。

进一步的，所述双波长是指采用550nm±20nm，450nm±20nm，630nm±20nm三种之中的两种；优选的，双波长是指采用550nm，450nm，630nm三种之中的两种。

优选的，微生物生化鉴定试验无色变黄色的试验，例如β半乳糖苷酶试验；

优选的，微生物生化鉴定试验无色变棕色的试验，例如对硝基苯丙氨酸脱羧酶试验，

优选的，微生物生化鉴定试验绿色变蓝色或黄色，例如使用溴百里酚蓝作为指示剂的麦芽糖发酵试验；

优选的，微生物生化鉴定试验黄色变红色的试验，例如使用酚红作为指示剂的精氨酸脱羧酶试验。