[发明专利]一种用于防治梨树根瘤病的微生物复合菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于防治梨树根瘤病的微生物复合菌剂，其特征在于：所述微生物复合菌剂中的各组分的重量百分比组分含量如下：

复合腐植酸10％-25％、土壤悬液5％-20％、硫酸铜5％-15％、杀菌活性物质粗提液3％-10％、氮酮3％-8％、井岗霉素7％-8％、甘油5％-10％、青霉素1％-3％、植枯灵1％-3％、ABT生根粉0.01％-0.1％，余量为水。

2.根据权利要求1所述的一种用于防治梨树根瘤病的微生物复合菌剂，其特征在于：所述的复合腐殖酸是利用玉米秸秆、麦秸、稻秸等多种绿色农作物的茎杆为原料进行粉碎、混料处理后，进行灭菌、发酵、在旋转大罐内进行固体发酵，再进行分离提取，制成成品。

3.根据权利要求1所述的一种用于防治梨树根瘤病的微生物复合菌剂，其特征在于：所述的土壤悬液是通过选择肥沃的土壤，铲去表土层，取土壤，备用，将铲去表土层的土壤放入无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，置摇床振荡3-8min使土样均匀分散在稀释液中成为土壤悬液。

4.根据权利要求1所述的一种用于防治梨树根瘤病的微生物复合菌剂，其特征在于：所述的杀菌活性物质粗提液中含有杀菌活性物质为HSAF。

5.根据权利要求4所述的一种用于防治梨树根瘤病的微生物复合菌剂，其特征在于：所述杀菌活性物质粗提液的制备方法包括以下步骤：

1)、取产酶溶杆菌OH11菌株，划线接种至LB固体平板上，在28℃条件下活化培养24-36h；

2)、利用灭菌牙签挑取一个单菌落接种到一个含有LB液体培养基的三角瓶中，28℃条件下震荡培养16-24h，震荡频率为150r/min；

3)、将上述步骤2)所得的种子液以体积比为2％的比例接种到10％TSB培养基中进行发酵，发酵温度为28℃，以每分钟通过发酵液的空气体积与发酵液体积之比为0.5-2.0:1的方式，进行发酵通气，搅拌速度为80-160r/min，发酵时间为72h；

4)、将发酵液利用双层纱布过滤，煮沸10min，然后6000r/min离心15分钟取上清，用HPLC测定发酵上清中HSAF含量，并利用纯水将HSAF的浓度调整到80mg/L，得到杀菌活性物质粗提液。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种用于防治梨树根瘤病的微生物复合菌剂，其特征在于：所述微生物复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：

将复合腐植酸、土壤悬液、硫酸铜、杀菌活性物质粗提液、氮酮、井岗霉素、甘油、青霉素、植枯灵、ABT生根粉分别按比例在室内用水溶解，然后按顺序将其倒入容器中置摇床振荡5-10min使各组分均匀混合即可，所述的顺序依次是：复合腐植酸、土壤悬液、氮酮、植枯灵、ABT生根粉、杀菌活性物质粗提液、甘油、青霉素、井岗霉素、硫酸铜，室温控制在16℃以上。