[发明专利]一种外源基因定点整合T7噬菌体基因组的方法及应用

说明书

本发明涉及一种向T7噬菌体导入外源基因的方法及其应用，属于生物工程技术领域。该方法中采用T7噬菌体，为gene 10，gene 11缺陷型T7噬菌体，且其基因组中含有一个正向的处于gene 9基因下游的整合酶宿主整合attB位点；pIVOP‑EXS质粒，其基因组中含有上述T7噬菌体编码gp10A蛋白的完整基因座，以及整合酶蛋白编码区；微环DNA，含有待导入外源基因片段，整合酶噬菌体整合attP位点，以及上述T7噬菌体gp11蛋白的编码区。采用该产品的整合策，略将外源基因的导入效率大大提高，弥补了同源重组法整合效率偏低的不足，而本系统不必直接对T7噬菌体基因组进行体外基因工程改造的技术优势，结合与同源重组法相近的简易实验流程，大为降低了实际应用的技术门槛和经济成本。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别是涉及一种外源基因定点整合T7噬菌体基因组的方法及应用。

背景技术

T7噬菌体是一种以大肠杆菌(Escherichia coli)为宿主的烈性噬菌体，具有基因组简洁(39.937kbp)，增殖周期短的优点，目前已被应用于杀菌药物开发及蛋白文库展示。

T7噬菌体的应用离不开基因工程改造，特别是外源基因的导入。传统的导入方法依赖于同源重组，方法是将两侧带有靶点上下游约50bp同源序列的外源基因片段克隆至供体质粒，T7噬菌体在带有该质粒的宿主菌中持续增殖，便会产生携带外源片段的后代。随着T7噬菌体体外包装技术的发展，研究者们可以采用分子生物学方法先进行T7噬菌体基因组的体外基因工程改造，再经过体外包装获得具备侵染能力的噬菌体颗粒，即体外克隆法。

虽然上述两种方法已经为T7噬菌体基因工程开辟了道路，但仍有各自的短处。同源重组法最大弊端是重组子的产率不高，需要严谨的正向筛选标记，否则重组子的筛选费时费力。而借助体外包装技术，重组子的获取难度大大降低，但体外包装的试剂成分复杂，目前主要依赖商业化成品，经济成本较高，而且直接对T7噬菌体基因组进行基因工程改造并不如常规分子克隆般便捷，因此体外克隆法存在技术门槛较高的问题。

发明内容

基于此，有必要针对现有的T7噬菌体外源基因导入方法仍存在各种应用上的不足，例如，同源重组法整合效率偏低，难以应用于外源基因的批量化导入，体外克隆法的经济成本与技术门槛较高，不利于常规实验室的推广等缺陷。本发明提供一种向T7噬菌体导入外源基因的产品及方法，采用该产品和方法，既能保证外源基因的高效导入，又能降低整体的经济成本与实践技术门槛的工程T7噬菌体整合系统。本系统提供的体内整合策略将外源基因的导入效率大大提高，弥补了同源重组法整合效率偏低的不足，而本系统不必直接对T7噬菌体基因组进行体外基因工程改造的技术优势，结合与同源重组法相近的简易实验流程，大为降低了实际应用的技术门槛和经济成本。

一种T7噬菌体，所述T7噬菌体为gene 10，gene 11缺陷型T7噬菌体，且其基因组中含有正向的处于gene 9基因下游的整合酶宿主整合attB位点。

本发明还功能开了一种含pIVOP-EXS质粒的宿主菌，所述质粒基因组中含有上述T7噬菌体编码gp10A蛋白的完整基因座，以及整合酶蛋白编码区；所述gp10A蛋白即上述T7噬菌体gene 10所编码蛋白。

可以理解的，以上对宿主菌的种类不进行限定，只需符合T7噬菌体宿主的条件均可。但是，选用上述宿主菌，具有较好的效果。

本发明还公开了一种微环DNA，所述微环DNA含有待导入外源基因片段，整合酶噬菌体整合attP位点，以及上述T7噬菌体gp11蛋白的编码区；所述gp11蛋白即上述T7噬菌体gene 11所编码蛋白。

本发明还公开了一种向T7噬菌体导入外源基因的产品，包括上述的T7噬菌体，上述的含pIVOP-EXS质粒的宿主菌，上述的微环DNA。