[发明专利]一种检测miRNA-218-5p表达水平的试剂在制备鸭肠粘膜氧化应激损伤检测试剂中的应用

权利要求书

1.一种检测miRNA-218-5p表达水平的试剂在制备鸭肠粘膜氧化应激损伤检测试剂中的应用，其特征在于：所述miRNA-218-5p的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述检测是利用RT-qPCR检测，根据鸭小肠组织中的所述miRNA-218-5p的表达水平，判断鸭小肠抗氧化能力并进行筛选，所述鸭的品种为荆江鸭。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述miRNA-218-5p的靶基因是AKR7A2，所述miRNA-218-5p通过上调AKR7A2基因的表达，参与小肠上皮的氧化应激应答。

3.根据权利要求1所述应用，其特征在于：检测鸭小肠组织中的所述miRNA-218-5p表达水平，包括如下步骤：

(1)提取待测鸭小肠组织中含有miRNA的总RNA；

(2)设计目标miRNA和内参miRNA U6的茎环引物，利用反转录酶进行miRNA反转录；

(3)采用miRNA特异的正向引物，以及通用下游引物，利用荧光定量PCR试剂盒进行miRNA-218-5p和内参miRNA U6的扩增；

(4)扩增后利用2^-△△Ct法计算获得miRNA-218-5p的表达水平。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述荧光定量PCR试剂盒包括反转录试剂、miRNA-218-5p的茎环引物，miRNA-218-5p上游引物和下游引物、内参miRNA U6茎环引物、miRNA U6上游引物和下游引物和荧光定量PCR反应试剂；

miRNA-218-5p的茎环引物为：

CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACATGGTT；

miRNA-218-5p上游引物为：CTGGTAGGTTGTGCTTGATCTA；

miRNA-218-5p下游引物为：TCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGC；

内参miRNA U6的特异性茎环引物为：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACAAAAATATG；

miRNA U6上游引物为：CTCGCTTCGGCAGCACA；

miRNA U6下游引物为：AACGCTTCACGAATTTGCGT。