[发明专利]一种NR2F1抗原的检测方法及其反应池

说明书

本发明公开了一种NR2F1抗原的检测方法的方法及其反应池，属于生物技术领域，解决了现有检测方法的检测成本高等问题，一种NR2F1抗原的检测方法，包括如下步骤：步骤A:制备葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液；步骤B:制备NR2F1第一抗体修饰工作电极的电极纸片；步骤C:将步骤B中的电极纸片插入反应池，滴加NR2F1抗原提取液进入反应池，再滴加步骤A中葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液，反应1～3min后，滴入葡萄糖溶液，反应20～40s后，检测电流；步骤D：滴加不同浓度的NR2F1抗原提取液重复步骤C，根据抗原浓度与电流值的关系，制成标准曲线；步骤E：取待测样品进行检测，得到待测样品中NR2F1抗原浓度值。本发明具有检测便携、成本低等优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种NR2F1抗原的检测方法及其反应池。

背景技术

肿瘤细胞中的NR2F1水平决定了肿瘤细胞是处于休眠状态还是激活状态，可以预测乳腺癌患者体内发生转移的肿瘤细胞是否具有致死性。乳腺癌患者对骨髓里肿瘤细胞中的NR2F1水平进行测定即可预测随后的致死危险性,雄激素剥夺治疗与NR2F1水平增加有关，早期通过雄激素剥夺治疗有助于降低乳腺癌的复发风险。因此，对骨髓里肿瘤细胞中的NR2F1水平进行检测对乳腺癌治疗具有重要意义，医护人员在诊断乳腺癌时，前期可检测NR2F1抗原浓度作为参考指标。

但是现有的一些检测方法对NR2F1检测时存在以下缺点，第一，大型设备较为昂贵且需要专业人员操作；第二，检测需要到专业实验室进行，不便于受试者方便检测；第三，耗费时间比较长，操作比较繁琐。因此，需要寻找一种简单、快速、及时的方法对NR2F1进行检测。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术中存在的上述问题，提供了一种NR2F1抗原的检测方法，本发明的第二目的在于提供用于实现上述方法的反应池。

本发明的第一个目的可通过下列技术方案来实现：一种NR2F1抗原的检测方法，包括如下步骤：

步骤A:制备葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液；

步骤B:制备NR2F1第一抗体修饰工作电极的电极纸片；

步骤C:将步骤B中的电极纸片插入反应池，滴加NR2F1抗原提取液进入反应池，再滴加步骤A中葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液，反应1～3min后，滴入葡萄糖溶液，反应20～40s后，检测电流；

步骤D：滴加不同浓度的NR2F1抗原提取液重复步骤C，根据抗原浓度与电流值的关系，制成标准曲线；

步骤E：取待测样品进行检测，得到待测样品中NR2F1抗原浓度值。

优选的，所述的步骤A中葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液的制备方法为：取10ml 0.2mg/ml的纳米二氧化钛溶液滴加到8ml 0.1mg/ml的3-氨基丙基三甲氧基硅烷的甲醇溶液中，得到混合液a；将混合液a与18ml 0.1mg/ml的纳米银溶胶混匀形成混合液b；将2μl 5μg/ml的NR2F1第二抗体加入到混合液b中得到混合液c；将混合液c与10ml 0.2mg/ml葡萄糖氧化酶混合，得到葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液。首先用3-氨基丙基三甲氧基硅烷的甲醇使纳米二氧化钛氨基化，氨基对纳米银颗粒具有很好的吸附性能，而纳米银又能有效的吸附蛋白，纳米二氧化钛具有优异的酶吸附性能，最后能得到葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液。