[发明专利]一种NR2F1抗原的检测方法及其反应池

权利要求书

1.一种NR2F1抗原的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A:制备葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液；

步骤B:制备NR2F1第一抗体修饰工作电极的电极纸片；

步骤C:将步骤B中的电极纸片插入反应池，滴加NR2F1抗原提取液进入反应池，再滴加步骤A中葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液，反应1～3min后，滴入葡萄糖溶液，反应20～40s后，检测电流；

步骤D：滴加不同浓度的NR2F1抗原提取液重复步骤C，根据抗原浓度与电流值的关系，制成标准曲线；

步骤E：取待测样品进行检测，得到待测样品中NR2F1抗原浓度值。

2.根据权利要求1所述的一种NR2F1抗原的检测方法，其特征在于：所述的步骤A中葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液的制备方法为：取10ml 0.2mg/ml的纳米二氧化钛溶液滴加到8ml 0.1mg/ml的3-氨基丙基三甲氧基硅烷的甲醇溶液中，得到混合液a；将混合液a与18ml 0.1mg/ml的纳米银溶胶混匀形成混合液b；将2μl 5μg/ml的NR2F1第二抗体加入到混合液b中得到混合液c；将混合液c与10ml 0.2mg/ml葡萄糖氧化酶混合，得到葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液。

3.根据权利要求1所述的一种NR2F1抗原的检测方法，其特征在于，所述步骤B中:取2μl0.1mg/ml石墨烯-全氟磺酸溶液涂于电极纸片的碳电极上；滴加1μl 0.1mg/ml的半胱氨酸溶液至电极上；将纳米银溶胶滴涂到电极表面；滴加2μl 5μg/ml的NR2F1第一抗体溶液于电极表面，最后在室温下干燥形成工作电极，得到NR2F1第一抗体修饰工作电极的电极纸片。

4.根据权利要求1所述的一种NR2F1抗原的检测方法，其特征在于：步骤C中，将步骤B中的电极纸片插入反应池，滴加0.5ml的NR2F1抗原提取液进入反应池，再滴加步骤A中1ml的葡萄糖氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液，反应2min后，滴入2ml 0.1mg/ml的葡萄糖溶液，反应30s后，检测电流。

5.根据权利要求1所述的一种NR2F1抗原的检测方法，其特征在于：步骤C中，滴入葡萄糖溶液前，需用去离子水冲洗电极纸片的工作电极及反应池。

6.根据权利要求1所述的一种NR2F1抗原的检测方法，其特征在于：步骤D中，NR2F1抗原提取液的浓度分别为5.0×10-9mol/L、1.0×10-8mol/L、5.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、5.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L、1.5×10-6mol/L、2.0×10-6mol/L。

7.根据权利要求1所述的一种NR2F1抗原的检测方法，其特征在于：步骤E中，将步骤B中的电极纸片插入反应池，滴加待测样品，再滴加步骤A中1ml氧化酶修饰的NR2F1第二抗体溶液，反应2min后，滴入2ml 0.1mg/ml的葡萄糖溶液，反应30s后，检测电流，带入步骤D中的标准曲线计算得到待测样品中NR2F1抗原浓度值。