[发明专利]一种山羊环状RNA circ_ZCCHC2及其鉴定方法及应用

说明书

本发明提出一种山羊环状RNA circ_ZCCHC2及其鉴定方法及应用，通过山羊环状RNAcirc_ZCCHC24超表达载体质粒的构建方法构建的超表达载体含有环状RNA表达载体pCD2.1‑ciR和山羊环状RNAcirc_ZCCHC24的全长序列信息，能够促进山羊卵泡颗粒细胞的增殖，通过该山羊环状RNAcirc_ZCCHC24将为进一步解析山羊卵泡颗粒细胞发育的遗传机理提供了新的思路，对于研究山羊繁殖性状的遗传本质及培育高繁山羊品种具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种山羊环状RNA circ_ZCCHC2及其鉴定方法及应用。

背景技术

环状RNA(Circular RNAs,circRNA)是一种新型的内源性非编码RNA，它是在mRNA前体(pre-mRNA)剪切过程中，外显子和(或)内含子的5’端与3’端以反向剪切(BackSplicing)形式连接3’和5’磷脂键，最终形成共价闭合环状RNA分子。根据构成不同，circRNA分为外显子circRNA(exonic circRNA)、内含子circRNA(intronic circRNA,ciRNAs)和外显子-内含子circRNA(exon-intron circRNA,EIciRNAs)。CircRNA在细胞核内调控来源基因(Host gene)的表达，在细胞质内则发挥ceRNA(competing endogenousRNAs,内源性竞争RNA)的作用。继miRNA和lncRNA后，circRNA已成为非编码RNA研究领域的新热点。

circRNAs主要通过三种机制发挥调控功能：(1)作为miRNA的海绵吸附体调控基因的表达(ceRNA)；(2)circRNA结合RNA结合蛋白(RBP)以形成RNA-蛋白复合物(RPC)，调控线性亲本基因的转录；(3)已经有数篇论文研究发现circRNA可编码蛋白质，发挥生物学功能。

卵泡发育机制的研究文献众多，取得了大量重要结论，但是在非编码RNA，尤其是circRNA调控卵泡发育的研究仍非常有限。早在1993年，Capel等人就在在小鼠精子决定基因SRY中发现了环状RNA，并且SRY也被证实可以吸附miR-138，发挥miRNA海绵作用。Cheng等研究发现，在孕产妇衰老过程中，人类卵巢颗粒细胞中circRNA可能在葡萄糖代谢、有丝分裂细胞周期和卵巢激素生成过程中发挥作用。但circRNA具有多种途径发挥调控作用，例如可以吸附miRNA、通过影响其靶基因的表达来实现功能。众所周知，miRNA具有强大的生物学功能，在卵泡发育中的作用已得到大量证明，因此提出circRNA通过miRNA来调控卵泡发育这一假设具有充足的理由。对于补充circRNA在家畜卵泡发育中的作用机制、丰富卵泡发育的调控信号具有重要意义。因此，本发明提出一种山羊环状RNA circ_ZCCHC2及其鉴定方法及应用，以解决现有技术中的不足之处。

发明内容

针对上述问题，本发明提出了一种山羊环状RNA，名称为circ_ZCCHC24，提供了一种circ_ZCCHC24的检测方法和功能应用，通过提供了一种山羊环状RNA circ_ZCCHC24的鉴定和构建超表达载体的方法，详尽的验证了山羊环状RNA circ_ZCCHC24是否成环及超表达载体在检测山羊卵泡颗粒细胞增殖分化过程中的作用，通过将山羊环状RNA circ_ZCCHC24的表达载体质粒转染山羊卵泡颗粒细胞。与空白对照组比较发现，超表达山羊环状RNAcirc_ZCCHC24促进山羊卵泡颗粒细胞的增殖，这一新发现的山羊环状RNA将为进一步解析山羊卵泡颗粒细胞发育的遗传机理提供了新的思路，对于研究山羊繁殖性状的遗传本质及培育高繁殖力山羊品种具有重要的意义。

本发明提出一种山羊环状RNA，包括山羊环状RNA circ_ZCCHC24，所述山羊环状RNA circ_ZCCHC24的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。