[发明专利]一种益生菌胞外多糖的提取方法

说明书

本发明公开了一种益生菌胞外多糖的提取方法。采用的技术方案是：将益生菌发酵液离心除去沉淀菌体，加入80‑100目聚酰胺振荡2‑10h，抽滤回收聚酰胺，取滤液减压浓缩至原体积的20‑80％，调pH值至5‑9，加1‑5倍体积95％乙醇，4℃静置2‑16h，离心倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解，透析后冷冻干燥保存。本发明明确了从益生菌发酵液中提取胞外多糖的过程中除蛋白的方法和醇沉的工艺，采用本发明的方法可以有效提高益生菌胞外多糖的得率，获得有一定抗氧化活性的胞外多糖。

技术领域

本发明涉及一种益生菌胞外多糖的提取方法，属于微生物学领域。

背景技术

益生菌胞外多糖是指一些益生菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的次级代谢产物，根据其与细胞壁结合的能力强弱可分为两种，一种失去与细胞结合的能力而渗入培养基形成粘液，称粘液多糖；另一种粘附于细胞壁形成荚膜，称荚膜多糖。在自然环境中，胞外多糖通常起着保护微生物的作用，它可以避免细胞干燥脱水，遭噬菌体浸染、受抗生素或者有毒物质损害、原生动物伤害，还可以稳定渗透压、支持细胞结构、参与细胞信息传递和细胞构成等。

益生菌胞外多糖作为一种安全的天然产物，因其独特的理化特性，越来越多地被应用于食品工业中。它能改善乳制品和豆乳制品的流变性、乳化性、黏着性以及质构特性，使其变得更加细腻均匀、平滑稠密，还能提高焙烤类食品保水性，改善面包体积和柔软度。近年来，随着研究的深入，益生菌胞外多糖的抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等生理功能也逐渐引起人们的关注。

目前，胞外多糖提取过程中除蛋白的方法多采用三氯乙酸法，该法反应剧烈，极易破坏多糖的结构，且三氯乙酸本身具有毒性，此法得到的多糖不利于功能性研究与应用。

由于益生菌菌株本身特性不同，现有生产方法中，其胞外多糖产量从几十到几百毫克每升不等，得率较低，制约其大规模生产，因此如何提高产量与提取量是目前急需解决的问题。当前我们对优化培养基成分与发酵条件提高胞外多糖产量的研究较多，而对优化从发酵液中提取胞外多糖的研究甚少。

发明内容

针对益生菌胞外多糖提取量的问题，本发明的目的是提供一种能提高益生菌胞外多糖提取量的制备方法。

本发明采用的技术方案是：一种益生菌胞外多糖的制备方法，包括如下步骤：

1)除菌体：将益生菌发酵液在4℃条件下，10000r/min离心10min，除去沉淀菌体，保留上清液；

2)除蛋白：向步骤1)中所得的上清液中加入聚酰胺，室温下置于摇床振荡2-10h，使蛋白质吸附于聚酰胺，然后抽滤去除聚酰胺；

3)浓缩：将步骤2)所得滤液浓缩至原体积的20-80％，得浓缩液；

4)醇沉：调节浓缩液的pH，加入95％乙醇，4℃静置，离心，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置透析袋中透析24h，冻干保存。

上述的一种益生菌胞外多糖的提取方法，步骤2)中，按固液比，聚酰胺：上清液＝40-200g：1L。

上述的一种益生菌胞外多糖的提取方法，步骤2)中，按固液比，聚酰胺：上清液＝120g：1L。

上述的一种益生菌胞外多糖的提取方法，步骤2)中，所述的聚酰胺粒径为80-100目。

上述的一种益生菌胞外多糖的提取方法，步骤3)中，将步骤2)所得滤液浓缩至原体积的20％。

上述的一种益生菌胞外多糖的提取方法，步骤4)中，所述的95％乙醇的加入量是浓缩液的1-5倍。

上述的一种益生菌胞外多糖的提取方法，步骤4)中，所述的95％乙醇的加入量是浓缩液的4倍。

上述的一种益生菌胞外多糖的提取方法，步骤4)中，所述的静置的时间为2-16h。