[发明专利]一种椰子成熟合子胚组织培养方法

权利要求书

1.一种椰子成熟合子胚组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体的选择：成熟合子胚；

(2)依次采用愈伤诱导培养基、愈伤扩繁培养基、体胚诱导培养基、体胚成熟培养基、体胚萌发培养基、再生植株壮根培养基和组培苗移栽培养基进行培养；

其中，

愈伤诱导培养基为：在Y3培养基中添加100～150μM 2,4-D、5～10μM 6-BA、2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～50g/L蔗糖；

愈伤扩繁培养基与愈伤诱导培养基相同；

体胚诱导培养基为：在WPM培养基中添加10～20μM 2,4-D、2～8μM ABA、2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～50g/L蔗糖；

体胚成熟培养基为：在WPM培养基中添加2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～50g/L蔗糖；

体胚萌发培养基为：在WPM培养基中添加8～16μM NAA、2～8μM ABA、2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～50g/L蔗糖；

再生植株壮根培养基为：在1/2CRI72培养基或WPM培养基中添加0.20～0.60μM GA₃、1～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～60g/L蔗糖；所述1/2CRI72培养基为：5～10mM硝酸铵、5～10mM硝酸钾、0.5～1mM磷酸二氢钠、0.5～1.5mM氯化钙、0.5～1.5mM硫酸镁、100～150μM硼酸、80～100μM硫酸锰、20～40μM硫酸锌、1.0～1.5μM硫酸铜、0.5～1μM钼酸钠、0.5～1μM氯化钴、2～5μM碘化钾、80～100μM硫酸亚铁、80～100μM Na₂EDTA、500～650μM硫酸钠、500～600μM肌醇、20～40μM烟酸、20～40μM盐酸硫胺、0.5～1μM生物素、2～5μM D-泛酸钙、3～6μM盐酸吡多醇、5～10μM核黄素、5～10μM抗坏血酸、100～120μM L-盐酸半胱氨酸和30～50μM甘氨酸；

组培苗移栽培养基为：按质量比，蛭石：椰糠：珍珠岩＝2～6:1～2:1～2。

2.根据权利要求1所述的椰子成熟合子胚组织培养方法，其特征在于，

愈伤诱导培养基为：在Y3培养基中添加110μM 2,4-D、8.8μM 6-BA、4g/L植物凝胶、3g/L活性炭和40g/L蔗糖；

体胚诱导培养基为：在WPM培养基中添加16μM 2,4-D、5μM ABA、4g/L植物凝胶、3g/L活性炭和40g/L蔗糖；

体胚成熟培养基为：在WPM培养基中添加4g/L植物凝胶、3g/L活性炭和40g/L蔗糖；

体胚萌发培养基为：在WPM培养基中添加10μM NAA、5μM ABA、4g/L植物凝胶、3g/L活性炭和40g/L蔗糖；

再生植株壮根培养基为：在1/2CRI72培养基或WPM培养基中添加0.46μM GA₃、2g/L植物凝胶、3g/L活性炭和45g/L蔗糖；

组培苗移栽培养基为：按质量比，蛭石：椰糠：珍珠岩＝2:1:1。

3.根据权利要求1所述的椰子成熟合子胚组织培养方法，其特征在于，在愈伤诱导培养阶段，培养基pH值为5.75～5.80，培养条件为27～29℃暗培养，培养时间1～3个月。

4.根据权利要求1所述的椰子成熟合子胚组织培养方法，其特征在于，在愈伤扩繁培养阶段、体胚诱导培养阶段和体胚成熟培养阶段，培养基pH值为5.75～5.80，培养条件为27～29℃暗培养，每1个月继代1～2次，共继代2～3次。

5.根据权利要求1所述的椰子成熟合子胚组织培养方法，其特征在于，在体胚萌发培养阶段，培养基pH值为5.75～5.80，培养条件为27～29℃，光周期12～18h/d，每个月继代1～2次，直至植株再生。

6.根据权利要求1所述的椰子成熟合子胚组织培养方法，其特征在于，在再生植株壮根培养阶段，培养基pH值为5.75～5.80，培养条件为27～29℃，光周期12～18h/d，每个月继代1～2次，共继代2～3次。