[发明专利]一种新型鞣花酸化合物及利用鞣花酸化合物制备活化部分凝血活酶时间测定试剂

说明书

本发明属于凝血试剂制备技术领域，针对鞣花酸难溶于水的特性，提供一种新型鞣花酸化合物，由鞣花酸和固体分散剂按一定比例混合制备而成；提高了鞣花酸的溶解度，解决了鞣花酸易沉淀的问题，保证了产品中鞣花酸的稳定性，也提供了利用鞣花酸化合物制备活化部分凝血活酶时间测定试剂的方法，该试剂由脂质体、鞣花酸化合物、金属离子、稳定剂、防腐剂按一定比例制备而成；所制备的试剂通过利用鞣花酸固体化合物解决了鞣花酸易沉淀的问题，并对脂质体组分进行了优化，降低了活化部分凝血酶原试剂产品间的批间差，产品的稳定性好，保证了活化部分凝血酶原试剂的质量。

技术领域

本发明属于凝血试剂制备技术领域，具体涉及一种新型鞣花酸化合物及利用鞣花酸化合物制备活化部分凝血活酶时间测定试剂。

背景技术

活化部分凝血活酶时间APTT(activated partial thromboplastin time)是目前常用的筛查内源性凝血系统是否正常的较敏感试验，广泛用于出血疾病的初筛诊断，内源性凝血系统凝血因子缺乏的检测、肝素抗凝质量时的实验室检测、狼疮抗凝物质的检测等。

活化部分凝血活酶时间（APTT）原理是将待测血浆加入APTT试剂，37度混匀预热一定时间，利用激活剂激活FXII，以磷脂作为部分凝血活酶，在钙离子参与下，观察血浆凝固所需的时间，即为活化部分凝血活酶时间，常用的激活剂有白陶土，二氧化硅，鞣花酸等。APTT应用于凝血系统的测定，是简单、快速和便宜的项目，目前利用鞣花酸作为激活剂面临的主要问题为鞣花酸在水中的溶解度低，并且鞣花酸与金属离子形成复合物后才可启动内源的凝血系统，鞣花酸当于金属离子形成激活剂后，更易形成沉淀，使溶液中有效的鞣花酸成份降低，延长APTT测定时间，影响检测结果及试剂的稳定性。另一问题为对于APTT试剂目前国内外很难标准化，主要原因为磷脂种类的不同，目前市场上销售的APTT试剂中含有的磷脂为动物提取的脑磷脂，该来源的磷脂无法保证产品活性的稳定性及提取的磷脂种类比例。

发明内容

本发明针对鞣花酸难溶于水的特性，利用固体分散剂作为载体，将难溶物分散至载体中，从而提高难溶物在水中的溶解性能，本发明制备了一种新型的鞣花酸化合物，可提高鞣花酸在水中的溶解度，并提供了利用鞣花酸化合物制备活化部分凝血活酶时间测定试剂。

本发明采用的技术方案如下：一种新型鞣花酸化合物，由鞣花酸和固体分散剂按照质量比为1:10-1:40混合制备而成；所述固体分散剂为醋酸丁酸纤维素CMCAB、醋酸丙酸纤维素酯CAApd或邻苯二甲酸羟丙基纤维素HPMCP中的任意一种；其制备方法为：精密称取鞣花酸和分散剂，混合均匀溶解于有机溶剂，按鞣花酸和分散体混合物与有机溶剂浓度为30-60g/L

在室温搅拌溶解于有机溶剂中，低压80-30kpa，温度在40度时蒸发至完全去除有机溶剂，干燥保存即可。

所述有机溶剂为丙酮、乙醇或甲醇中的任意一种或两种以任意比例混合的混合溶液。

所述固体分散剂优选为邻苯二甲酸羟丙基纤维素HPMCP。

利用所述的一种鞣花酸化合物制备的活化部分凝血活酶时间测定试剂，该试剂由如下终浓度的原料配置而成：脂质体20µg/ml-100µg/ml、鞣花酸化合物0.3mg/ml－1mg/ml、金属离子5-30mM、稳定剂1% W/V、防腐剂0.1% W/V；其制备方法为：按比例称取鞣花酸化合物溶解于HEPES缓冲液中，室温搅拌2h混匀，加入防腐剂、稳定剂，混匀，加入金属离子和脂质体混合即可。

该试剂优选配比为：由如下终浓度的原料配置而成：脂质体40µg/ml、鞣花酸化合物10mg/ml、金属离子20mM、稳定剂1% W/V、防腐剂0.1% W/V。