[发明专利]一种肿瘤化疗药个体化基因检测试剂盒、引物及方法有效
| 申请号： | 201811473838.7 | 申请日： | 2018-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN110004225B | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 黄铨飞;韩冉冉;吴春求;倪晨子;吕来灰;李慧 | 申请（专利权）人： | 东莞博奥木华基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11;C40B50/06;C40B40/06 |
| 代理公司： | 44205 广州嘉权专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 谭英强 |
| 地址： | 523808 广东省东莞市松山湖高新技*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肿瘤化疗 个体化 基因检测试剂盒 特异性引物组 建库 引物 基因多态性位点 多态性位点 特异性引物 一次性检测 测序数据 多重PCR 均一性 试剂盒 文库 成功率 基因 检测 | ||
1.一种肿瘤化疗药个体化基因检测试剂盒，包括：检测肿瘤化疗药个体化基因的特异性引物组；所述特异性引物组包括针对下述13个多态性位点进行设计的特异性引物：CDA基因的rs2072671、rs60369023，DPYD基因的rs3918290，MTHFR基因的rs1801133，UGT1A1基因的rs8175347，ABCB1基因的rs1045642、rs2032582，GSTP1基因的rs1695，CYP19A1基因的rs4646，XRCC1基因的rs25487、rs1799782，ERCC1基因的rs11615，CYP2D6基因的rs1065852。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述特异性引物组包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:26所示的特异性引物。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述特异性引物组中的每条特异性引物5’端还连接有建库测序所需的通用序列。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述通用序列选自公共引物、接头、特异性标签。
5.一种肿瘤化疗药个体化基因检测引物组，其特征在于：所述引物组为权利要求1～4任一项所述试剂盒中的特异性引物组。
6.一种肿瘤化疗药个体化基因的建库方法，所述方法用于非疾病诊断目的，包括步骤：根据测序平台建库需求，利用权利要求1～4任一项所述的试剂盒或权利要求5所述的特异性引物组，对模板DNA进行多重PCR扩增，获得扩增子文库，对扩增子文库进行混合、纯化，获得肿瘤化疗药个体化基因的文库。
7.根据权利要求6所述的建库方法，其特征在于：所述方法进一步包括步骤：
（1）在SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:26所示的特异性引物序列5’端连接公共引物作为特异性引物组，并加入测序接头、标签接头和扩增缓冲液，对模板DNA进行多重PCR扩增，获得扩增子文库；其中，不同模板DNA所用的标签接头不同；测序接头和标签接头3’端连接了公共引物；
（2）将获得的扩增子文库混合，纯化，获得肿瘤化疗药个体化基因的文库。
8.根据权利要求7所述的建库方法，其特征在于：所述25μL多重PCR扩增反应体系为：模板DNA含量100～300ng、特异性引物组8～12pM、测序接头8～12pM，标签接头8～12pM、扩增缓冲液12.5μL，无核酸酶水为余量。
9.根据权利要求7所述的建库方法，其特征在于：所述多重PCR扩增反应条件为：①95℃3～5min；②34～36个循环扩增，每个循环： 95℃ 10～20s，60℃ 80～100s，72℃ 30～45s；③72℃ 1～2min，④8～16℃保持。
10.利用权利要求6～9任一项所述建库方法获得的肿瘤化疗药个体化基因的文库。
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