[发明专利]胚胎染色方法、判断胚胎发育能力的方法及试剂盒

说明书

本发明属于胚胎发育领域。更具体地，本发明提供了一种胚胎染色方法、一种判断胚胎发育能力的方法、以及用于实施所述两种方法的试剂盒。本发明方法可以简单且准确地判断胚胎发育能力，并且经历过本发明方法的胚胎依然能够继续发育，例如继续发育至孵化状态。

技术领域

本发明属于胚胎发育领域。更具体地，本发明涉及一种胚胎染色方法、一种判断胚胎发育能力的方法、及用于执行所述方法的试剂盒。

背景技术

当前存在着诸多的可以用于鉴别或评估胚胎质量的方法，但是这些方法各自存在着各自固有的缺陷。目前被广泛使用的形态鉴别能够无损地鉴别胚胎质量，并且能够在一定程度上预测胚胎移植后的妊娠率。但是这种方法主观性强，有时会出现评估后鉴定为质量好的囊胚而妊娠失败的情况，鉴定后认为质量差的囊胚反而能够妊娠。

染色排斥试验、酶活性试验、葡萄糖吸收量检测、以及死细胞和活细胞检测也能够用于鉴别或评估胚胎质量，但是这些方法会对胚胎造成伤害，且不能用于单个胚胎的检测。

一些特殊染色方法和技术也成功应用于组织学研究，例如可以使用免疫荧光染色法来进行胚胎体外染色，由此来对胚胎发育进行判断。但此方法需要先将胚胎固定，而固定后的胚胎中的细胞已经死亡并停止发育，并且该方法只能允许观察到胚胎某一个发育阶段的形态。

综上所述，亟需找到一种能够客观、准确地判断胚胎发育能力的方法，且经历该方法的胚胎后续依然能够继续发育。建立这样的方法，可解决构建判断胚胎体外发育状况的模型，为研究人或动物体外辅助生殖技术、胚胎质量鉴定提供良好的试验平台。

发明内容

如上所述，本领域已经开发出成熟的胚胎体外免疫荧光染色体系，但是该体系需要对胚胎进行固定等处理，所以不能够保证染色后胚胎依然存活。

为解决该技术问题，本发明人经过反复的研究，意外地发现，可以用活细胞染色剂和死细胞染色剂对胚胎进行染色，而不会影响胚胎发育；本发明人进一步发现，在对上述染色胚胎进行照相之后，可以根据从照片中获得的死细胞比率准确地判断胚胎的后续发育能力，藉此完成了本发明。

因此，在第一方面，本发明提供了一种胚胎染色方法，包括以下步骤：a)采用活细胞染色剂对胚胎进行活细胞染色；并b)采用死细胞染色剂对该胚胎进行死细胞染色。

在第二方面，本发明提供了一种判断胚胎发育能力的方法，包括以下步骤：a)实施本发明第一方面的胚胎染色方法；b)用激发光照射经染色的胚胎，并拍摄图像，然后根据获得的图像计算胚胎死细胞比率；并且c)如果在步骤b)中获得的胚胎死细胞比率在一个阈值以下，则判断该胚胎能够继续发育，如果在步骤b)中获得的胚胎死细胞比率高于该阈值，则判断该胚胎不能继续发育。

在第三方面，本发明提供了一种用于实施本发明第一方面或第二方面的方法的试剂盒，包括：活细胞染色剂、死细胞染色剂、以及用于指导如何实施本发明第一方面的胚胎染色方法的说明书或者用于指导如何实施本发明第二方面的判断胚胎发育能力的方法的说明书。

通过采用本发明的方法和/或试剂盒，可以对胚胎进行染色和鉴定，并且鉴定为发育状况良好的大腔囊胚后续能够继续发育到孵化状态。因此，本发明的方法为深入研究胚胎体外质量鉴别提供良好的试验工作平台。

附图说明

图1为示出染色前的小鼠囊胚的照片(10×)；

图2为示出FDA/PI双染后的小鼠囊胚的照片(10×)；

图3为示出染色后继续发育至孵化状态的小鼠囊胚的照片(10×)。

具体实施方式