[发明专利]胚胎染色方法、判断胚胎发育能力的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种胚胎染色方法，包括以下步骤：

a)采用活细胞染色剂对胚胎进行活细胞染色；并

b)采用死细胞染色剂对该胚胎进行死细胞染色。

2.根据权利要求1所述的胚胎染色方法，其中所述胚胎为来源于哺乳动物的胚胎，例如为来源于小鼠、大鼠、猪、牛、羊、或者灵长类动物如人的胚胎。

3.根据权利要求1或2所述的胚胎染色方法，其中在步骤a)中，所述活细胞染色剂为二乙酰荧光素(FDA)、DIO、13、24、newport green、亮甲酚蓝，并且在步骤b)中，所述死细胞染色剂为碘化丙啶(PI)或7-氨基放线菌素D(7AAD)、叠氮溴化丙锭(PMA)、叠氮溴乙锭(EMA)。

4.根据权利要求1-3任一项所述的胚胎染色方法，其中所述胚胎为小鼠胚胎，在步骤a)中采用二乙酰荧光素(FDA)对该小鼠胚胎的活细胞进行染色，并且在步骤b)中采用碘化丙啶(PI)对该小鼠胚胎的死细胞进行染色。

5.根据权利要求4所述的胚胎染色方法，其中所述二乙酰荧光素(FDA)的工作浓度为3-5μg/mL，优选为3.5μg/mL；所述碘化丙啶(PI)的工作浓度为3-10μg/mL，优选为5μg/mL。

6.根据权利要求4或5所述的胚胎染色方法，其中所述二乙酰荧光素(FDA)染色持续0.5-2分钟，优选1分钟；所述碘化丙啶(PI)染色持续3-10分钟，优选持续5分钟。

7.根据权利要求1-6任一项所述的胚胎染色方法，其中在进行步骤a)之前，还额外地进行胚胎培养直至发育稳定；具体地，在所述胚胎为小鼠胚胎时，采用KSOM培养基进行培养；优选地，所述KSOM包含0.8-1.2mg/ml、优选1mg/ml的牛血清白蛋白，且还包含1-1.2mg/ml、优选1.12mg/ml的乳酸钠。

8.一种判断胚胎发育能力的方法，包括以下步骤：

a)实施权利要求1-7任一项所述的胚胎染色方法；

b)用激发光照射经染色的胚胎，并拍摄图像，然后根据获得的图像计算胚胎死细胞比率；并且

c)如果在步骤b)中获得的胚胎死细胞比率在一个阈值以下，则判断该胚胎能够继续发育，

如果在步骤b)中获得的胚胎死细胞比率高于该阈值，则判断该胚胎不能继续发育。

9.根据权利要求8所述的方法，其中实施权利要求4-7任一项所述的胚胎染色方法，在步骤b)中用480nm-520nm的激发光照射，且步骤c)中所述的一个阈值为8.5％。

10.一种用于实施权利要求1-9任一项所述方法的试剂盒，包括：

a)活细胞染色剂，例如二乙酰荧光素(FDA)、DIO、13、24、newportgreen、亮甲酚蓝；

b)死细胞染色剂，例如碘化丙啶(PI)、7-氨基放线菌素D(7AAD)、叠氮溴化丙锭(PMA)、叠氮溴乙锭(EMA)；以及

c)用于指导如何实施权利要求1-7任一项的胚胎染色方法的说明书或者用于指导如何实施权利要求8或9的判断胚胎发育能力的方法的说明书。