[发明专利]同步分离细胞质和细胞核中蛋白质和RNA的试剂及方法

说明书

本发明涉及一种快速高效分离动物细胞蛋白质和RNA的提取试剂和方法。利用细胞裂解液和苯酚氯仿抽提法，通过优化提取条件，实现从细胞质或细胞核中同步分离蛋白质和RNA的目的。该方法适用于少量或珍贵细胞样本开展蛋白功能研究及RNA检测分析。

技术领域

本发明属于细胞生物学蛋白提取技术领域，涉及一种利用细胞裂解液和苯酚氯仿抽提法，从细胞质或细胞核中同步分离蛋白质和RNA的提取试剂和方法，该方法适用于少量细胞样本开展蛋白功能研究及RNA检测分析。

背景技术

随着精准医学和肿瘤生物学的快速发展，从大量临床样本中获取更多的疾病遗传信息受到越来越多的关注。整合蛋白质组学、转录组学以及代谢组学信息，可以全面的了解疾病发生发展的规律，为临床治疗寻找药物作用靶点。然而，由于试验样本有限，有时候不能同步提取DNA、RNA、蛋白质或代谢物，结果造成样本信息不对等，引起试验结果偏差较大等实际问题。因此，为了充分利用试验样本，从相同样本中同时获取蛋白、核酸或代谢物等信息，获取更多有价值的遗传背景信息，很多试剂公司或研究人员都致力于开发一些可以同步提取蛋白、核酸或代谢物的试剂或方法。

近些年蛋白质的提取方法主要包括水溶液提取法和有机溶剂提取法。前者适合提取大部分可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液的蛋白质，后者用来提取少数与脂类结合的蛋白质，常用有机溶剂包括乙醇、丙酮或丁醇等。提取出来的蛋白质可通过盐析、等电点沉淀、离子交换层析或亲和层析等方法进行分离。目前分离动物细胞蛋白质的试剂主要包括RIPA试剂，根据表面活性剂种类和比例不同，又分为强、中、弱细胞裂解液，适用于提取胞浆、胞核或细胞膜蛋白，满足后续WB或IP等实验要求。常用的表面活性剂有SDS、Triton X-100和NP-40等。

现阶段RNA提取试剂主要包括Trizol、RNAiso等试剂，其内含异硫氰酸胍和酚等物质，能迅速破碎细胞和溶解细胞中的其它成分，抑制细胞释放出核酸酶，维持细胞中RNA的稳定。当加入氯仿离心后，RNA进入水相，再用异丙醇沉淀水相中的RNA，即可达到提取总RNA的目的。该法所提RNA纯度高，完整性好，可用于定量PCR、Northern Blot、体外翻译和分子克隆等实验。

尽管有关蛋白质或RNA的提取试剂很多，提取方法比较成熟，但是可以同步分离蛋白质和RNA或DNA的试剂却很少，提取方法不够成熟，不能满足少量或珍贵细胞样本的实验要求，亟待解决。

发明内容

本发明的目的：一是提供一种高效快速地从动物细胞质或细胞核中提取总蛋白和RNA的提取试剂；二是利用上述提取试剂建立一种同步提取蛋白质和RNA的实验方法，可从少量或珍贵实验样本中同时分离细胞总蛋白和RNA，用于同步研究细胞蛋白组和转录组，节约细胞样本、获取很多有效数据。

本发明的技术方案如下：

一种快速高效提取动物细胞总蛋白和RNA的提取试剂，包括以下三种组分：

试剂A：包括20mM Tris-HCl(pH7.4)、10mM NaCl、3mM MgCl₂、0.1％NP40、1mM EDTA(pH8.0)和10％Glycerol，使用前添加蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和RNA分解酶抑制剂(现用现配)。

试剂B:100mM Tris-HCl(pH7.4)、2mM Na₃VO₄、100mM NaCl、1％TritonX-100、1mMEDTA、10％Glycerol、1mM EGTA、0.1％SDS、1mM NaF、0.5％deoxycholate和2mM Na₄P₂O₇。

试剂C：包含质量浓度为0.1％异硫氰酸胍盐和0.2％β-巯基乙醇的水饱和苯酚溶液；

一种利用上述提取试剂同步提取细胞质或细胞核蛋白和RNA的方法，包括以下步骤：