[发明专利]一种枸杞自交亲和性的S-RNase基因鉴定方法

说明书

本发明公开了一种枸杞自交亲和性的S‑RNase基因鉴定方法，其特征在于：以待检测枸杞基因组DNA为模板，利用一对专一设计的PCR引物，检测所述枸杞基因组中目标PCR扩增产物条带，所述一对专一设计的PCR引物的碱基组成分别为:5’‑GTGGGCAACCAAAAAGTGGGTTATG‑3’和5’‑GCCTTTTCGATATCATGAAGCA‑3’；检测在枸杞基因组DNA中是否含有所述目标PCR扩增产物条带，即枸杞DNA中S‑RNase基因中的一个特异基因型S2是否存在；根据步骤2的检测结果判断所检测枸杞植株是否为自交亲和枸杞；该方法通过特异的一个枸杞S‑RNase基因，根据基因的专一位点设计一对特异性PCR引物，利用幼苗的DNA或者叶片直接PCR，便可根据电泳条带的有无判断子代是否自交亲和，从而大大降低了杂交群体定植规模和人力时间成本。

技术领域

本发明属于农业育种及生物技术领域，具体涉及的是一种枸杞自交亲和性的S-RNase基因鉴定方法。

背景技术

自交不亲和性是影响枸杞产量的一个重要因素,自交不亲和的枸杞品种（系）单一种植时大面积落花，严重影响结实及产量，而自交亲和的主栽品种“宁杞1号”一直以来则产量非常稳定。因此从大量的杂交后代幼苗中筛选自交亲和性的植株是枸杞品种选育的一项重要目标，也是缩短育种周期和节约成本的一项关键技术。

自交不亲和性是植物保持遗传多样性的一种重要机制，根据遗传控制机理，分为孢子体型SSI（Sporophytic self-compatibility）和配子体型GSI（Gametophytic self-incompatibility）自交不亲和。研究证实，配子体自交不亲和性植物由单一的多态性S-位点控制，该位点为多基因复合体，至少包括花柱S基因与花粉S基因，已经明确蔷薇科、茄科及玄参科等GSI类植物具有共同的花柱S核酸酶（S-RNase）。S-RNase是雌蕊与花粉相互识别的关键物质，可通过信号识别控制花粉能否伸长，从而决定自交不亲和或自交亲和。

枸杞属于茄科（Solanacease）枸杞属（Lycium L.）的配子体GSI自交不亲和植物。发明人对枸杞多份种质资源的S-RNase基因进行了克隆和基因型分析，发现枸杞的S-RNase型种类较多，但是在自交亲和性的种质材料中存在一个共同的S-RNase基因的S2基因型，因此根据S2基因型特征如何筛选自交亲和性的枸杞材料成为枸杞育种过程中的一项关键技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从枸杞杂交后代幼苗中筛选自交亲和性植株材料的快速、准确方法，以缩短育种周期，并节约大量的人力、土地、农药等管理成本。

一种枸杞自交亲和性的S-RNase基因鉴定方法，其特征在于：

步骤1：以待检测枸杞基因组DNA为模板，利用一对专一设计的PCR引物，检测所述枸杞基因组中目标PCR扩增产物条带，所述一对专一设计的PCR引物的碱基组成分别为:

5’-GTGGGCAACCAAAAAGTGGGTTATG-3’和5’-GCCTTTTCGATATCATGAAGCA-3’，其中，PCR引物中，特异性碱基位点分别位于第七位的A碱基、第十一位的A碱基、第二十五位的G碱基和第十七位的G碱基、第二十二位的A碱基；

步骤2：检测在枸杞基因组DNA中是否含有所述目标PCR扩增产物条带,即枸杞DNA中S-RNase基因中的一个特异基因型S2是否存在；

步骤3：根据步骤2的检测结果判断所检测枸杞植株是否为自交亲和枸杞，在所述枸杞基因组DNA中含有S-RNase基因中的一个特异基因型S2，则所检测枸杞植株为自交亲和枸杞；在所述枸杞基因组DNA中不含有S-RNase基因中的一个特异基因型S2，则所检测枸杞植株为自交不亲和枸杞。

优选地，所述S-RNase基因的一个特异基因型S2，其DNA全长781bp，碱基组成序列为