[发明专利]一种枸杞自交亲和性的S-RNase基因鉴定方法

权利要求书

1.一种枸杞自交亲和性的S-RNase基因鉴定方法，其特征在于：

步骤1：以待检测枸杞基因组DNA为模板，利用一对专一设计的PCR引物，检测所述枸杞基因组中目标PCR扩增产物条带，所述一对专一设计的PCR引物的碱基组成分别为：

5’-GTGGGCAACCAAAAAGTGGGTTATG-3’和5’-GCCTTTTCGATATCATGAAGCA-3’；

步骤2：检测在枸杞基因组DNA中是否含有所述目标PCR扩增产物条带，即枸杞DNA中S-RNase基因中的一个特异基因型S2是否存在；

步骤3：根据步骤2的检测结果判断所检测枸杞植株是否为自交亲和枸杞，在所述枸杞基因组DNA中含有一个S-RNase基因的特异基因型S2，则所检测枸杞植株为自交亲和枸杞；在所述枸杞基因组DNA中不含有一个S-RNase基因的特异基因型S2，则所检测枸杞植株为自交不亲和枸杞。

2.根据权利要求1所述的一种枸杞自交亲和性的S-RNase基因鉴定方法，其特征在于：所述的S-RNase基因的一个特异基因型S2，其DNA全长781bp，碱基组成序列为

ATGTCTAAACCACAGCACACATCAGTTCTCTTCATGTTGCTTTTTGCTATTTCTTCTACTTATGGGAATTTCGAGTTATTGGAGCTCGTTTTGACGTGGCCACCAACTTTTTGCTACATGAACAATTGCAACAGATGGCCAATTCCAAACAATTTTACAATTCATGGGCTTTGGCCGGATAACAACTCCGTTATGCTGAATAACTGCGTGGGCAACCAAAAAGTGGGTTATGATATCATCATGGTAAATTACCAAACTAATTTTCTCAAATCTTCGTAATTCATTGATTCAAATGTCACCTTAGCGTTTGTTCATGTATTTATTGAATGAAGCCGTTTCAAAATGTATACAGGATGTCAGAAAACTAAGTGAGCTGGACAAACGCTGGCCTCAACTGAAATACGACTACCAAACTGGTATAGACGAACAATATCTCTGGAAAAAGGAATTCCTAAAACATGGAAGCTGTGGTATAAAGCGGTACCCACAGCCTGCATATTTTGATTTAGCCATGAATTTAAAAGACAAGTTTGATCTCTTGAGTACTCTCAGAAATCATGGGATTACTCCTGGTTCAACTTATCTGCTTCATGATATCGAAAAGGCCATAAAGACAGTTTCTATAAAGGTTCCTAGCCTCAAGTGCATTGAAAAATATCCTGGAGATGTGGAACTCAGTGAGATTGGTATATGTTTGGACCCAGAAGCAGAATATATGGTTCCTTGTCCTCGAACTGGGTCATGCCATAACAAGAGAACTAAGATAATTAAGTTCCGATGA，

DNA全长序列可以利用PCR引物5'-ATGTCTAAACCACAGCACACATC-3'和5'-TCATCGGAACTTAATTATCTTAGTTCTC-3'通过克隆测序获得。

3.枸杞杂交子代的早期筛选应用方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）枸杞基因组DNA准备，选用约2mm2新鲜枸杞叶片、利用CTAB法、其它试剂盒提取的枸杞基因组DNA中的任意一项；

（2）PCR反应体系，总反应体积20μl，包含枸杞基因组DNA模板1μl，10×buffer 2 μl，dNTP0.4 μl，Taq DNA Polymerase 0.25μl，上、下游引物各0.8μl，ddH2O 14.75μl；

（3）PCR控温程序，94℃预变性3min；94℃变性30s；56℃退火30s；72℃延伸1min，36个循环；72℃后延伸10min；μl；

（4）条带检测，1%-2%琼脂糖凝胶电泳，胶红或者EB染色，紫外灯下拍照，显示有条带，则为自交亲和，没有条带则为自交不亲和。

4.根据权利要求3所述的枸杞杂交子代的早期筛选应用方法，其特征在于：步骤4中条带检测是以枸杞基因组DNA为PCR模板，条带大小为399bp。