[发明专利]粒子测定方法、样本处理方法、以及粒子拍摄装置

说明书

本发明提供一种能够高效地在病理诊断等中获取有效信息的粒子测定方法、样本处理方法、以及粒子拍摄装置。本发明的粒子测定方法包括以下步骤：在粒子内标记及扩增粒子内的靶核酸的步骤（S13）、标记粒子表面的靶多肽和／或不同于靶核酸的其他靶核酸的步骤（S14）、测定标记的靶核酸和标记的靶多肽和／或标记的其他靶核酸的步骤（S2）。

技术领域

本发明涉及一种粒子测定方法、样本处理方法、以及粒子拍摄装置。

背景技术

检测出异常细胞的方法有将目标核酸作为靶核酸并让其扩增的原位PCR（in situPCR）法。非专利文献1中公开了检测出大肠杆菌内特定核酸的实验。如图16所示，在该实验中，操作者在用福尔马林固定大肠杆菌之后，对大肠杆菌进行蛋白酶处理，让耐热DNA聚合酶以及引物等试剂浸透于大肠杆菌内，在大肠杆菌内让靶核酸扩增。操作者用荧光显微镜确认靶核酸的存在。这样，原位PCR法通过让靶核酸扩增来切实地检测出靶核酸。

现有技术文献

非专利文献1，黑川显等人、“通过原位PCR法进行的肠出血性大肠杆菌的检测”、日本细菌学杂志、52（2）、513－518、1997年、日本细菌学会。

发明内容

发明要解决的技术问题

细胞和细菌等有异常，且其原因为核酸时，非专利文献1所公开的方法是有效的。但是，异常的原因不是核酸时，其他原因能列举出蛋白质等多肽的异常。或者，有时也会有核酸及多肽两者存在异常的情况。

例如，细胞所含数个核酸中有异常的原因时，对各个核酸使用有效的检测方法发现异常对进行适当的病理诊断来说是重要的。

本发明提供一种能够高效地在病理诊断等中获取有效信息的粒子测定方法、样本处理方法、以及粒子拍摄装置。

解决技术问题的技术方法

本发明第1部分涉及一种粒子测定方法。本部分的粒子测定方法包括以下步骤：在粒子内标记及扩增粒子内的靶核酸的步骤（S13）、标记粒子的靶多肽和／或不同于靶核酸的其他靶核酸的步骤（S14）、测定标记的靶核酸和标记的靶多肽和／或标记的其他靶核酸的步骤（S2）。

“粒子”意味着样本所含细胞和细菌等。测定对象粒子也可以是内质网的外泌体等。上述“样本”意味着直接从人身上采取的血液、皮肤等的组织切片等。“多肽”是氨基酸残基通过肽键相连而成的分子，例如也包括分子量较小的氨基酸聚合物、分子量大的蛋白质。

“靶核酸的标记及扩增”不限于仅意味让粒子内存在的核酸即DNA、信使RNA（mRNA）扩增。例如，近年盛行研究的作为细胞外囊泡的一种的外泌体的内部有微小RNA（miRNA）等的非编码RNA（ncRNA）、以及被这些控制的核酸也包含在对象中。靶核酸的扩增中不限于扩增该miRNA，也可以扩增由miRNA转录的核酸。本部分所涉及的粒子测定方法中，包括上述核酸的全部粒子为测定对象。下面以与“靶核酸的标记及扩增”同样的意义进行说明。

“其他靶核酸”意味着有互不相同基因信息的2个靶核酸中的一个靶核酸。还包括意味着核酸的碱基序列中互不相同的2个区域中的一个区域的情况。上述靶核酸及其他靶核酸可以是双链也可以是单链。

通过本部分所涉及的粒子测定方法能够对1个细胞同时进行靶核酸的扩增和标记、以及靶多肽的标记，或者对1个细胞同时进行互不相同的2个靶核酸的标记。为上述结构的话，关于1个细胞，能够就核酸异常的有无和多肽异常的有无、或者互不相同的2个核酸的异常的有无将各个信息以互补的形式关联起来，因此能获得在病理诊断等中有效的信息。

本部分所涉及的粒子测定方法中，靶核酸的标记及靶核酸的扩增先进行哪一个都可以。下面的“靶核酸的标记及扩增”也一样。