[发明专利]一种以杉木未木质化侧枝新梢为外植体的诱导生根方法

说明书

本发明公开了一种以杉木未木质化侧枝新梢为外植体的诱导生根方法，包括：1)外植体的制备和消毒；2)不定芽的诱导；3)不定芽的增殖；4)不定芽的生根。本发明的以杉木未木质化侧枝新梢为外植体的诱导生根方法，通过试验表明，酒精与升汞的组合处理更为适用杉木外植体消毒，其最适消毒方式为：75％酒精20～30s+0.1％升汞8～10min；DCR上的生根效果和组培苗成活率要明显高于现有常用的1/4MS培养基；有利于提高各无性系增殖倍数的最佳增殖培养基为DCR+0.6mg/L6‑BA+0.3mg/LIBA；为各杉木无性系个体诱导生根提供一张较为适宜的方法。

技术领域

本发明属于植物繁育技术领域，具体涉及一种以杉木未木质化侧枝新梢为外植体的诱导生根方法。

背景技术

杉木的繁育方式包括杂交、扦插、嫁接以及组织培养法。种子育苗是通过雌雄授粉完成，往往会存在大小年，且繁育后代会不断发生基因重组，无法保持母代的优良遗传性状得以稳定传递，通过无性繁殖可以解决这种后代分离问题。但随着杉木造林规模和经营水平的不断扩大，扦插与嫁接难以满足这一庞大需求，因此组织培养技术开始成为杉木无性系改良和培育的重要技术手段，其育苗过程逐步发展为科学的、规模的工厂化生产。与传统育苗方式相比组织培养技术培育出的苗木不仅生长健壮且整齐，而且原株的优良基因型包括加性和非加性效应可以稳定的遗传。南京林业大学已建立了包括“洋020”、“洋061”等多个优良无性系的组培快繁体系，为杉木无性系造林提供了丰富资源，同时也创造了巨大的经济财富。

目前杉木组织培养主要存在的问题包括：(1)基因型差异造成了杉木对组织培养的不同要求，比如外植体选择、基本培养基、激素配比等，因而需要为不同无性系建立一个系统的组培体系；(2)杉木外植体感染率高的问题仍然存在，迫切需要针对不同无性系材料去为它们筛选出最适的消毒灭菌方式，从而降低外植体的感染率和褐变率；(3)杉木外植体的增殖倍数、生根率以及增殖苗和根的质量有待进一步提高。因此，对杉木组织培养体系进行深入探究与完善意义重大。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种以杉木未木质化侧枝新梢为外植体的诱导生根方法，具有方法简单、诱导率高，生根率高等优点。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种以杉木未木质化侧枝新梢为外植体的诱导生根方法，包括以下步骤：

1)取C34号或C35号无性系杉木的中上部未木质化侧枝新梢作为外植体材料，进行消毒处理，备用；

2)将处理好的外植体接种在诱导培养基中，诱导培养30天以上，获得不定芽；其中，诱导培养基的基本培养基为3/4MS或1/2MS，附加有6-BA和NAA；

3)将步骤2)诱导后的外植体接种到增殖培养基中，进行不定芽的增殖培养40天以上；其中，增殖培养基的基本培养基为DCR，附加有6-BA和IBA；

4)将步骤3)增殖后的外植体，接种到生根培养基中，进行不定芽的生根培养30天以上；其中生根培养基以DCR培养基为基本培养基，附加0.2～0.4gm/LIBA、0.05～0.1gm/LNAA。

步骤1)中，以杉木中上部未木质化侧枝新梢作为外植体材料，穗条长8cm，分别于4月中旬晴天采集，采集后先用清水冲洗1-2h；多余茎段和针叶用剪刀剪去，保留3-5cm长的穗条，再用无菌水清洗去除附着在穗条上的碎叶，然后摆放在空瓶内进行消毒处理。

步骤1)中，消毒处理：75％酒精浸泡20～30s，清洗；0.1％升汞浸泡7～8min，轻荡，清洗。

步骤1)中，完成消毒后开始接种，首先用手术刀修去褐化叶片，保留0.3mm长；接着将每个穗条切割成1-1.5cm长的小段。