[发明专利]一种以杉木未木质化侧枝新梢为外植体的诱导生根方法

权利要求书

1.一种以杉木未木质化侧枝新梢为外植体的诱导生根方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取C34号或C35号无性系杉木的中上部未木质化侧枝新梢作为外植体材料，进行消毒处理，备用；具体为：以杉木中上部未木质化侧枝新梢作为外植体材料，穗条长8cm，分别于4月中旬晴天采集，采集后先用清水冲洗1-2h；多余茎段和针叶用剪刀剪去，保留3-5cm长的穗条，再用无菌水清洗去除附着在穗条上的碎叶，然后摆放在空瓶内进行消毒处理；消毒处理：75%酒精浸泡20~30s，清洗；0.1%升汞浸泡7~8min，轻荡，清洗；完成消毒后开始接种，首先用手术刀修去褐化叶片，保留0.3mm长；接着将每个穗条切割成1-1.5cm长的小段；

2）将步骤1）处理好的C35号外植体接种在3/4MS+0.8mg/L 6-BA+0.1~0.2mg/L NAA培养基中，诱导培养30天以上；将步骤1）处理好的C34号外植体接种在1/2MS+0.8mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA或3/4MS+0.8mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基中，诱导培养30天以上，获得不定芽；

3）将步骤2）诱导后的外植体接种到增殖培养基中，进行不定芽的增殖培养40天以上；其中，外植体为C34号无性系外植体，增殖培养基为DCR+0.6mg/L 6-BA+0.3mg/L IBA，外植体为C35号无性系外植体，增殖培养基为DCR+0.6mg/L 6-BA+0.3mg/L IBA；

4）将步骤3）增殖后的外植体，选取增殖继代2次以上长度达到3-4cm的健壮组培苗，剔除基部粘附的培养基，再将其接种到生根培养基上，进行不定芽的生根培养30天以上；其中，C34号无性系组培苗生根诱导的培养基为DCR+0.4mg/L IBA+0.1mg/L NAA；C35号无性系组培苗生根诱导的培养基为DCR+0.4mg/L IBA+0.05-0.1mg/L NAA。