[发明专利]利用转基因技术提高人表皮干细胞诱导为角膜上皮细胞效率的方法有效
| 申请号： | 201811467833.3 | 申请日： | 2018-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN109694855B | 公开（公告）日： | 2020-12-29 |
| 发明（设计）人： | 王皓毅;孔焕育;杜小明;杨骏;余兵生 | 申请（专利权）人： | 北京仁源欣生生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85 |
| 代理公司： | 苏州国诚专利代理有限公司 32293 | 代理人： | 卢华强 |
| 地址： | 102600 北京市大兴区中关村科技园区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 转基因 技术 提高 表皮 干细胞 诱导 角膜 上皮细胞 效率 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种非治疗目的的基因工程化的干细胞的制备方法，包括以下步骤：
S1.合成基因EEFSEC，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
S2.将基因EEFSEC插入表达载体，得到重组质粒；
S3.将重组质粒转染人表皮干细胞，得到基因工程化的干细胞；所述表达载体为pIRESneo3载体。
2.权利要求1的方法制备得到的工程化的人表皮干细胞。
3.一种人表皮干细胞的体外诱导向角膜上皮样细胞分化的方法，其特征在于：取权利要求2所述的工程化的人表皮干细胞在6孔板中进行细胞爬片，细胞种植密度控制在(5-9)X 104个/cm2，零添加的DMEM/F12培养液30摄氏度静饲3天，更换为角膜上皮细胞培养液，于孵箱中25摄氏度降温培养孵育，每2天半量换液，低温诱导，培养5天后即可，其中角膜上皮细胞培养液组成为：每100mL角质细胞培养液加入1mL 100X CEpiCGS角膜上皮细胞生长添加物 5ml，5pg/mL BSA，1 pg/mL胰岛素，25 ng/mL FGF，500 ng/mL肾上腺素，0.5 μg/mL氢化可的松，0.5nmo1/L前列腺素E2及30 nmol/L的三碘甲状腺原氨酸。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：角膜上皮细胞培养液中还包括角膜促进肽0.5 μg/mL。
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