[发明专利]一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的引物探针和试剂盒在审
| 申请号： | 201811466765.9 | 申请日： | 2018-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN109694913A | 公开（公告）日： | 2019-04-30 |
| 发明（设计）人： | 戴洋;倪碧娴;曹俊;刘燕红;郭利川;王智宏;应清界 | 申请（专利权）人： | 江苏省血吸虫病防治研究所;江苏奇天基因生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 214064 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 华支睾吸虫 荧光法检测 引物探针 等温扩增检测 反应缓冲液 试剂盒操作 阳性质控品 阴性质控品 反应试剂 现场检测 小型仪器 携带方便 荧光 探针 引物 灵敏 通用 检测 应用 配合 基层 | ||
1.一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的引物，其特征在于，所述引物序列如下：
上游引物：5’-TCATTACAGTACACAAAGCCCAAACACCTCAG-3’；SEQ ID NO.1；
下游引物：5’-GCTCCACCGTAGGCAGACAACGCTGCAGCATG-3’；SEQ ID NO.2。
2.根据权利要求1所述的一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的引物，其特征在于，所述上游引物和下游引物的使用浓度为0.05～0.2mM。
3.根据权利要求2所述的一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的引物，其特征在于，所述上游引物和下游引物的使用浓度为0.1mM。
4.一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的探针，其特征在于，所述探针序列如下：
5’-CGTCATGCCCGTTGTTCTTGCAGCCTTGCCTGCCTAGGGCGGAGCGATTCT-3’；SEQ ID NO.3；
所述探针采用荧光报告基团和荧光淬灭基团进行修饰，荧光报告基团修饰在探针序列离5'端碱基数30bp的位置上；荧光淬灭基团修饰在探针序列离3'端碱基数16bp的位置上，荧光报告基团与淬灭基团之间间隔3个碱基GCC，其中碱基C用四氢呋喃残基替换。
5.根据权利要求4所述的一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5；所述荧光淬灭基团为TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL。
6.根据权利要求5所述的一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM或HEX；所述荧光淬灭基团为BHQ1或BHQ2。
7.根据权利要求4-6任一项所述的一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的探针，其特征在于，所述探针的浓度为0.01～0.03mM。
8.根据权利要求7所述的一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的探针，其特征在于，所述探针的浓度为0.02mM。
9.一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物、权利要求3所述的探针、RAA荧光通用反应试剂、反应缓冲液、阴性质控品和阳性质控品；所述反应缓冲液包括：200mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液、260mM的MgAc和质量分数为20％的PEG 20000；所述阳性质控品中含有华支睾吸虫的基因组DNA，所述华支睾吸虫基因组DNA的浓度为1×104Copies/ul；所述阴性质控品为ddH2O或纯化水。
10.一种RAA荧光法检测华支睾吸虫的反应参数，其特征在于，在30-42℃下等温扩增5-20min。
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