[发明专利]一种药物肺部代谢特征的体外评价方法有效
| 申请号： | 201811466514.0 | 申请日： | 2018-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN109298102B | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | 胡卓汉;孙易;李国栋;郝祝兵;荣义 | 申请（专利权）人： | 瑞德肝脏疾病研究(上海)有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 药物 肺部 代谢 特征 体外 评价 方法 | ||
1.一种药物肺部代谢特征的体外评价方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)制备肺亚细胞组织；
(2)采用步骤(1)所得肺亚细胞组织分别配制阳性质控体系、阴性质控体系、对照组反应体系和试验组反应体系，孵育培养，离心取上清液；
(3)分别检测步骤(2)所述阳性质控体系和阴性质控体系上清液中的阳性底物的母体含量，以及对照组反应体系和试验组反应体系上清液中的待测物的母体含量；
所述阳性质控体系的阳性底物包括2-氨基芴，4-甲氧基-1,8-萘二甲酰亚胺，非那西丁或4-甘薯黑疤霉二醇中的任一种或至少两种的组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阳性底物为2-氨基芴。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述2-氨基芴的终浓度为0.05-0.2μM。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)之后还包括稀释的步骤，具体包括：所述稀释为稀释至肺亚细胞组织的蛋白浓度为0.5-4mg/mL。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肺亚细胞组织包括肺S9或肺微粒体。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述肺S9的蛋白质量浓度为2-4mg/mL。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述肺微粒体的蛋白质量浓度为0.5-2mg/mL。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述肺微粒体的蛋白质量浓度为0.5-1mg/mL。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述阳性质控体系包括阳性底物、肺亚细胞组织和NADPH辅酶。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述NADPH辅酶的终浓度为1-2mM。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述NADPH辅酶的终浓度为1mM。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述阴性质控包括阳性底物、肺亚细胞组织和Tris缓冲液。
13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述对照组反应体系包括待测物、肺亚细胞组织和Tris缓冲液。
14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述试验组反应体系包括待测物、肺亚细胞组织和NADPH辅酶。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述待测物的终浓度为0.1-10μM。
16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述孵育的时间为60-240min。
17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述孵育的时间为120min。
18.根据权利要求9、12、13或14任一项所述的方法，其特征在于，阳性质控体系、阴性质控体系、对照组反应体系和实验组反应体系中所述NADPH辅酶或Tris缓冲液加入前包括预孵育的步骤。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述预孵育的时间为3-8min。
20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述预孵育的时间为5min。
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