[发明专利]一种检测HPV18 E7蛋白的单克隆抗体及其制备和应用

说明书

本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种检测HPV18 E7蛋白的单克隆抗体及其制备和应用。本发明最终得到特异性高、亲和力强、能够稳定表达且重复性良好的单克隆抗体，能特异性的识别HPV18 E7蛋白，具有用于制备防治宫颈癌、阴茎癌、会阴部癌、阴道癌、肛门癌及口咽部癌等癌症的药物的潜力。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及到一种检测HPV18 E7蛋白的单克隆抗体及其制备和应用。

背景技术

HPV是一种小DNA病毒，具有很强的嗜鳞状上皮的特性，主要侵犯鳞状上皮的基底层细胞和位于宫颈转化区的化生细胞。目前已知的HPV有一百多个型别，根据致癌性，分为高危型HPV和低危型HPV两类。高危HPV感染(如16和18型)导致大多数宫颈、阴茎、会阴部、阴道、肛门及口咽部癌和癌前病变；而非致癌性、低危型的HPV感染(如6和11型)会导致生殖器疣和复发性呼吸道乳头瘤样增生。

宫颈癌是目前病因唯一明确的肿瘤，它是人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)持续感染的结果。癌症发生过程中HPV DNA整合入人体细胞基因组内，转化型细胞内开始持续表达HPV E6和E7蛋白。HPV E6蛋白通过E6-AP(E6 associated protein)的介导，结合并降解抑癌蛋白p53；HPV E7蛋白与抑癌蛋白pRb结合，使pRb释放核转录因子E2F，致使细胞过度增殖，细胞周期调控失控，导致细胞的永生化并促进宫颈癌的发生。

高危HPV E7蛋白作为癌蛋白在宫颈癌(前)病变发生中的作用已经明确，然而由于HPV E7癌蛋白较低的免疫原性阻断了其在宫颈癌检测中的作用。关于HPV E7蛋白溶液结构的研究表明E7蛋白高度保守的N端是非结构化的，这可能是其免疫原性低的一个原因。并且高危HPV E7蛋白在细胞内的定位会随着细胞融合的不同状态而改变，即HPV E7蛋白在细胞内的分布处于一种动态，且HPV E7蛋白可处于胞质和胞核中。因此，特异性识别高危HPV E7蛋白的单克隆抗体较难获得。本发明通过采用纯化的GST-HPV18 E7重组蛋白免疫小鼠，同时通过ELISA检测、免疫组化等实验，最终得到一种特异性高、亲和力强、能够稳定表达且重复性良好的单克隆抗体，该抗体能够特异性地检测宫颈上皮癌(前)变细胞中位于细胞核内的HPV18 E7蛋白。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，提供一种能特异性识别HPV18 E7蛋白的单克隆抗体，而与其他蛋白无交叉反应，显著提高了HPV18 E7蛋白检测的特异性、准确性和可靠性，真实反映细胞核内HPV18 E7蛋白的表达水平，可应用于制备防治宫颈癌、阴茎癌、会阴部癌、阴道癌、肛门癌及口咽部癌等癌症的药物的潜力。

本发明的第一方面，提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区包含：氨基酸序列为SEQ ID NO：1-3所示的HCDR；所述单克隆抗体的轻链可变区包含：氨基酸序列为SEQ ID NO：4-6所示的LCDR；

进一步的，所述单克隆抗体为人源、鼠源、兔源或嵌合抗体；

进一步的，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；

更进一步的，所述单克隆抗体为特异性抗HPV的抗体；优选地，所述单克隆抗体为特异性抗HPV18的抗体；更优选地，所述单克隆抗体为特异性抗HPV18 E7蛋白的抗体，且该蛋白定位在细胞核中。

本发明第二方面，提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白包含本发明第一方面中任一所述的单克隆抗体，以及任选的协助表达和/或纯化的标签序列；

进一步的，所述的标签序列包括6x His标签；