[发明专利]一种培养产物与基质完全分离的牛樟芝培养方法

说明书

本发明提供了一种培养产物与基质完全分离的牛樟芝培养方法，其选用谷物与牛樟树木屑混合作为培养基质，将不同谷物混匀后置于下层，少量牛樟树木屑铺于其上，接种时在培养基中间打一个圆柱体槽，将菌种块接入其中。培养完成后，培养基质表面形成了一层致密且有一定厚度的菌丝层，该菌丝层可轻易剥离，同时在圆柱体槽内形成一个类似于菌柄的菌丝体，将其上半部分取样，剩余菌丝体还可继续生长。利用此法，本发明不仅解决了固体培养法培养产物较难与基质完全分离的问题，还可除去培养产物中混有的木屑并提升其产量及三萜类成分含量，为牛樟芝固态发酵培养方面的实践提供了参考帮助，同时也为后续大规模发酵培养提供了基础，其成本低廉、操作简易。

技术领域

本发明涉及一种牛樟芝的培育方法，特指一种培养产物与基质完全分离的牛樟芝培养方法。

背景技术

牛樟芝 (Antrodia camphorata)属于多孔菌科、薄孔菌属，是中国台湾特有的一种珍稀药用真菌。2016年6月广东省人民政府办公厅印发了《广东省推动中药材保护和发展实施方案(2016－2020) 的通知》［粤府办(2016)61］，将牛樟芝列为加强中药材资源保护、建设濒危稀缺中药材种植养殖基地、开展20种重点保护和发展的特色中药资源评价及繁育技术研究的品种之一。牛樟芝的菌丝体及子实体均含有丰富的生理活性物质，包括三萜类化合物、多糖、马来酸和琥珀酸衍生物等。现代学者研究发现，牛樟芝不仅对化学性引起的肝损伤具有保护作用，同时还具有抗癌、抗氧化、抗炎及免疫调节等作用。

牛樟芝功效显著，市场需求量剧增，野生牛樟芝生长缓慢，产量极低，且牛樟芝的唯一宿主牛樟树为国家保育类树种，故现多采用人工培育的方式培养牛樟芝。人工培养的方法主要有椴木培养法、固体培养法、液体培养法。椴木培养法生长周期长，质量较难控制，但可培养得到与野生牛樟芝成分相近的牛樟芝子实体；液体培养法培养周期短，产量高，但培养产物有效成分含量较低，无法培养得到牛樟芝子实体；固体培养法生长周期适中，质量可控，培养达到一定时间时可得到与野生牛樟芝成分相近的牛樟芝子实体，但培养产物往往较难与基质分离。

发明内容

本发明的目的在于针对已有的技术现状，提供一种低成本、工艺简单、产质量佳，且可使培养产物与基质完全分离的牛樟芝培养方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明为一种培养产物与基质完全分离的牛樟芝培养方法，主要包括以下步骤：

（1）活化接种原料：取4℃保存的牛樟芝菌种于PDA平板培养基上活化培养15-30d后在靠近菌丝层边缘处打孔，打孔器直径为0.8cm，得到菌丝块用于接种；

（2）制备固态发酵培养基：称取一定量的谷物原料及牛樟树木屑放于培养瓶中，谷物原料混匀后置于培养瓶下层，牛樟树木屑平铺于其上；另将葡萄糖、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O溶于一定量的蒸馏水形成含有葡萄糖与无机盐的溶液，随后将该溶液倒入培养瓶中浸泡固体物料，使培养基的最终含水量为50%-70%，浸泡时间为2h，然后放入高压灭菌锅中灭菌，灭菌温度为121℃，时间为30min；

（3）打孔接种：用玻璃棒在固体培养基中心位置打一个2cm左右深的圆柱形槽，将原料菌丝块含有菌丝的一面贴着培养基质接种在圆柱形槽孔内，并置于恒温培养箱中28℃暗培养；

（4）无菌超净台取样：培养一定时间后，在基质表面形成厚度为3-5cm左右可轻松剥离的致密菌丝层，在无菌超净台中取样，培养基中剩余的菌丝体还可继续生长。

上述方案中，牛樟树木屑的处理方法为置于室外暴晒后用高压灭菌锅灭菌，灭菌温度为121℃，时间为2h，灭菌后将其放入烘箱中80℃烘干。

进一步的，谷物原料为大米50g、麸皮2.5g，将干料混匀后装入培养瓶中，培养瓶体积为450mL。