[发明专利]一种基于CD19和PSMA的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用

说明书

本发明涉及一种基于CD19和PSMA的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用，所述双重嵌合抗原受体包括嵌合抗原受体CD19和嵌合抗原受体PSMA。所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导结构域以及可诱导自杀融合结构域串联而成。本发明的嵌合抗原受体能特异性的识别肿瘤表面抗原CD19和PSMA，相比于使用其他单一嵌合抗原受体T细胞，联合使用两种抗原靶向CAR‑T细胞使得治疗效果更好，不易发生CD19逃逸，更容易缓解疾病。

技术领域

本发明涉及肿瘤的细胞免疫治疗领域，尤其涉及一种基于CD19和PSMA的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用，具体为以肿瘤特异靶点CD19和PSMA为基础的嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞技术的构建方法及其在抗肿瘤治疗中的应用。

背景技术

随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成为目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。一般，嵌合抗原受体CAR由一个肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜区域以及胞内信号转导区组成。通常，CAR包含抗体的单链片段可变(Single chain fragmentvariable，scFv)区或对肿瘤相关抗原(tumor associated antigen,TAA)具有特异性的结合结构域，其通过铰链和跨膜区与T细胞信号传导分子的胞质结构域偶联。最常见的淋巴细胞活化部分包括与T细胞效应物功能触发(例如CD3ζ)部分串联的T细胞共刺激结构域。CAR介导的过继性免疫疗法允许CAR-T移植的T细胞以非HLA限制性方式直接识别靶肿瘤细胞上的TAA。

大多数患有B细胞恶性肿瘤(包括B细胞急性淋巴细胞性白血病(B cell acutelymphocytic leukemia,leukemia,B-ALL)和慢性淋巴细胞性白血病(chroniclymphocytic leukemia,CLL)的患者将由于其疾病而死亡。治疗这些患者的一种方法是通过CAR的表达，对T细胞进行遗传修饰以靶向在肿瘤细胞上表达的抗原。CAR是经设计以人白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)非依赖性方式识别细胞表面抗原的抗原受体。尝试使用表达CAR的遗传修饰细胞来治疗这些类型的患者已经取得了有前景的成功。

CD19分子是治疗B淋巴细胞系肿瘤潜在的靶点，也是CAR研究中的热点，CD19的表达局限于正常和恶性B细胞，是广泛接受的用来安全测试的CAR靶标。靶向CD19分子的嵌合抗原受体基因修饰的T细胞(CD19CAR-T)在治疗多发性、难治性的急性B淋巴细胞白血病上取得巨大成功，而在难治性、复发性慢性B淋巴细胞白血病和B淋巴细胞系淋巴瘤的治疗中疗效明显较差。

CN 104788573 A公开了一种嵌合抗原受体hCD19scFv-CD8α-CD28-CD3ζ及其用途，该第二代嵌合抗原受体由抗人CD19单克隆抗体HI19a轻链和重链可变区(hCD19scFv)、人CD8α铰链区、人CD28跨膜区和胞内区、以及人CD3ζ胞内区结构串联构成，该专利中的CD19在进行一次CAR-T细胞回输后，CD19的表达量会降低，容易逃过免疫机制，而且第二代CART的免疫因子风暴大，有安全性的隐虑。

此外，根据本中心以第四代CD19嵌合抗原受体治疗淋巴瘤的实际统计，在9位病人当中，其中有4位肿瘤组织免疫组化染色CD19强阳性的病人，在接受CD19嵌合抗原受体治疗后都达到完全缓解，另外5位CD19弱表达的病人，只有1位在治疗后达到缓解，其余2位只有部分缓解，1位维持疾病的稳定，1位疾病有进展，此结果反应了单以CD19嵌和抗原受体治疗的困境。

因此，针对CD19阴性复发，以及CD19低表达的B细胞肿瘤，联合另一种潜在的嵌合抗原受体能够解决CD19存在的易突变和表达量低的问题显得尤为重要。除CD19外，PSMA亦是治疗恶性B细胞肿瘤的潜力靶点，根据本中心对16位B细胞淋巴瘤患者的肿瘤进行免疫组化染色检测到98％的阳性率，表示PSMA此靶点确实可应用于B细胞淋巴肿瘤的治疗当中。