[发明专利]一种基于CD19和PSMA的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞及其应用

权利要求书

1.一种基于CD19和PSMA的双重嵌合抗原受体基因修饰的免疫细胞，其特征在于，所述双重嵌合抗原受体包括嵌合抗原受体CD19和嵌合抗原受体PSMA。

2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区、CD3ζ信号传导结构域和可诱导自杀融合结构域串联而成；

优选地，所述抗原结合结构域为针对肿瘤表面抗原CD19的单链抗体和针对肿瘤表面抗原PSMA的单链抗体。

3.根据权利要求1或2所述的免疫细胞，其特征在于，所述针对肿瘤表面抗原CD19的单链抗体的氨基酸序列具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中的任意一个：

(I)具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(II)与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有≥90％，优选≥95％，更优选≥98％，最优选≥99％同源性的氨基酸序列；

(III)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；

所述氨基酸序列具有针对肿瘤表面抗原CD19的单链抗体的活性；

优选地，所述针对肿瘤表面抗原PSMA的单链抗体的氨基酸序列具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中的任意一个：

(I)具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

(II)与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列具有≥90％，优选≥95％，更优选≥98％，最优选≥99％同源性的氨基酸序列；

(III)与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；

所述氨基酸序列具有针对肿瘤表面抗原PSMA的单链抗体的活性。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的免疫细胞，其特征在于，所述跨膜结构域为CD28跨膜结构域和/或CD8α跨膜结构域；

优选地，所述共刺激信号传导区为CD28信号传导结构域、CD27信号传导结构域或CD137信号传导结构域中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述可诱导自杀融合结构域为包含胱天蛋白酶9结构域；

优选地，所述胱天蛋白酶9结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

优选地，所述可诱导自杀融合结构域通过2A序列与CD3ζ信号传导结构域相串联。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区、CD3ζ信号传导结构域、2A序列和可诱导自杀融合结构域串联而成；

优选地，所述嵌合抗原受体为Secretory信号肽、CD19抗原结合结构域和/或PSMA抗原结合结构域、CD8α和/或CD28跨膜结构域、CD28信号传导结构域、CD27信号传导结构域、CD3ζ信号传导结构域、2A序列和胱天蛋白酶9结构域串联而成；

优选地，所述嵌合抗原受体CD19为Secretory-CD19scFv-CD28-CD27-CD3ζ-2A-FBKP.Casp9；所述嵌合抗原受体PSMA为Secretory-PSMA scFv-CD28-CD27-CD3ζ-2A-FBKP.Casp9；

优选地，所述嵌合抗原受体CD19的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示或与其具有90％以上同源性的氨基酸序列；

优选地，所述嵌合抗原受体PSMA的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示或与其具有90％以上同源性的氨基酸序列。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的免疫细胞，其特征在于，所述双重嵌合抗原受体通过其编码的核酸序列转染到T细胞中表达；

优选地，所述转染的方式为通过病毒载体、真核表达质粒或mRNA序列中的任意一种或至少两种的组合转染到T细胞，优选为通过病毒载体转染到T细胞；

优选地，所述病毒载体为慢病毒载体或逆转录病毒载体中的任意一种或至少两种的组合，优选为慢病毒载体。