[发明专利]一种抗大豆花叶病毒基因GmST1、GmST1转基因大豆的培育方法与应用

说明书

一种抗大豆花叶病毒基因GmST1、GmST1转基因大豆的培育方法与应用，属于大豆遗传育种技术领域。针对传统方法培育抗病品种存在的多倍体化，转化率低的问题，本发明提供了一种抗大豆花叶病毒转基因大豆的培育方法，包括如下步骤：将所述的抗大豆花叶病毒基因GmST1(核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示)构建到植物表达载体上，得到大豆GmST1基因重组载体；将上述重组载体导入农杆菌中，然后侵染大豆，培养后经鉴定获得转基因阳性植株。本发明可用于抗花叶病毒作物育种工作中。

技术领域

本发明属于大豆遗传育种技术领域，具体涉及一种抗大豆花叶病毒基因GmST1、GmST1转基因大豆的培育方法与应用。

背景技术

大豆(Glycine max)是我国乃至世界上重要的粮食、经济作物。大豆花叶病毒病由大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus，SMV)引起，是影响大豆产量和品质最严重的病毒性病害之一。在我国东北大豆主产区，N1和N3毒株为优势株系，其导致的大豆植株非正常生长可造成大豆大面积减产25％-60％,严重时甚至绝产。由于传统育种方法的局限性，因此利用分子手段筛选及鉴定有效的抗病基因，对抗病品种的选育便显得尤为重要，这为选育抗病品种提高了效率和准确性，加快了选育抗病品种的进程。由于大豆基因组庞大且大豆存在的多倍体化现象及低转化率等问题，迄今为止报道的具有功能明确的抗SMV基因相对较少。

发明内容

针对传统方法培育抗病品种存在的多倍体化，转化率低的问题，本发明提供了一种抗大豆花叶病毒基因GmST1，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明提供了上述包含抗大豆花叶病毒基因GmST1的重组载体、重组菌或转基因植株。

本发明提供了一种抗大豆花叶病毒转基因大豆的培育方法，包括如下步骤：

1)将所述的抗大豆花叶病毒基因GmST1构建到植物表达载体上，得到大豆GmST1基因重组载体；

2)将上述重组载体转化大豆，培养后经鉴定获得转基因阳性植株。

进一步地限定，步骤1)所述GmST1基因通过PCR扩增获得，所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；扩增所用的DNA为大豆抗病品种的cDNA，所述抗病品种为东农93-046、铁豆52或铁豆54。

进一步地限定，步骤1)所述植物表达载体为pCAMBIA3301。

进一步地限定，步骤2)所述重组载体通过农杆菌介导法转入大豆，所述农杆菌为农杆菌EHA105；所述大豆的品种为东农50、垦农30、Peking、绥农10、绥农14、东农594、红丰11或L-28。

进一步地限定，步骤2)所述鉴定包括检测转基因植株是否同时转入目的基因GmST1与筛选标记基因、检测目的基因表达量以及转基因植株后代抗病表型鉴定。

更进一步地限定，所述检测筛选标记基因转入所用引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:4和SEQ ID NO:5所示；所述检测目的基因GmST1转入所用引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:6和SEQ ID NO:7所示。

更进一步地限定，所述目的基因表达量的检测采用qRT-PCR方法，其中检测GmST1基因表达量所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示；用于对照的基因为病毒外壳蛋白基因，检测病毒外壳蛋白基因表达量所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示。

本发明所述的培育方法获得的转基因大豆可用于抗花叶病毒作物育种中。

有益效果