[发明专利]一种抗大豆花叶病毒基因GmST1、GmST1转基因大豆的培育方法与应用

权利要求书

1.一种抗大豆花叶病毒基因GmST1在提高大豆抗大豆花叶病毒能力中的应用，其特征在于，所述抗大豆花叶病毒基因GmST1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.包含权利要求1中所述的抗大豆花叶病毒基因GmST1的重组载体、重组菌或转基因植株在提高大豆抗大豆花叶病毒能力中的应用。

3.一种抗大豆花叶病毒转基因大豆的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将权利要求1中所述的抗大豆花叶病毒基因GmST1构建到植物表达载体上，得到大豆GmST1基因重组载体；所述植物表达载体为pCAMBIA3301；

2)将上述重组载体转化大豆，培养后经鉴定获得转基因阳性植株；所述大豆的品种为东农50、垦农30、Peking、绥农10、绥农14、东农594、红丰11或L-28。

4.根据权利要求3所述的培育方法，其特征在于，步骤1)所述GmST1基因通过PCR扩增获得，所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；扩增所用的DNA为大豆抗病品种的cDNA，所述抗病品种为东农93-046、铁豆52或铁豆54。

5.根据权利要求3所述的培育方法，其特征在于，步骤2)所述重组载体通过农杆菌介导法转入大豆，所述农杆菌为农杆菌EHA105。

6.根据权利要求3所述的培育方法，其特征在于，步骤2)所述鉴定包括检测转基因植株是否同时转入目的基因GmST1与筛选标记基因、检测目的基因表达量以及转基因植株后代抗病表型鉴定。

7.根据权利要求6所述的培育方法，其特征在于，所述检测筛选标记基因转入所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示；所述检测目的基因GmST1转入所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示。

8.根据权利要求6所述的培育方法，其特征在于，所述目的基因表达量的检测采用qRT-PCR方法，其中检测GmST1基因表达量所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示；用于对照的基因为病毒外壳蛋白基因，检测病毒外壳蛋白基因表达量所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示。

9.权利要求3-8任意一项所述的培育方法获得的转基因大豆在抗花叶病毒作物育种中的应用。