[发明专利]Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用

说明书

本发明公开了Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。本发明从巴戟天内生真菌拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729发酵液中分离出2个Guanacastane类新化合物koninginol A和koninginol B。本发明通过抗菌活性测试发现，化合物koninginol A对枯草芽孢杆菌具有显著的抗菌活性，化合物koninginol B对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有显著的抗菌活性，可用于制备抗菌药物，具有良好的应用开发前景。因此，本发明为研究与开发新的抗菌药物提供了候选化合物，为开发利用植物内生真菌资源提供科学依据。

技术领域：

本发明属于生物和医药领域，具体涉及Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。

背景技术：

植物内生真菌(endophytic fungi)是指生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物组织内，但不对植物组织引起明显病害症状的真菌(Tan RX and Zou WX,2001)。内生真菌具有丰富的物种多样性和遗传多样性，迄今已从植物内生真菌中发现了不少新的或稀有的真菌物种，已成为国内外的研究热点。植物内生真菌生长于植物内部的特殊环境中，其产生活性化合物远远超出其植物代谢产物的范围，能够产生各种结构类型独特、具有潜在应用前景的活性物质，已成为发现新的天然活性物质的重要资源。

巴戟天(Morinda officinalis)为茜草科多年生木质藤本植物，是我国的四大南药之一，含有蒽醌类、有机酸类、甾醇类、环烯醚萜苷萜、糖类(林美珍等，2010)等，有强筋骨、祛风湿的作用。研究药理表明：巴戟天具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、消炎镇痛等药理作用。因此，从巴戟天内生真菌中发现具有抗菌作用的新化合物，可为新药研发提供化学实体。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一类具有抗菌活性的Guanacastane类新化合物。

本发明的Guanacastane类新化合物，结构如式(I)所示：

1为化合物koninginol A、2为化合物koninginol B。

本发明的第二个目的是提供Guanacastane类化合物koninginol A和koninginolB的制备方法，所述的化合物koninginol A和koninginol B是从拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物中制备得到。

优选，具体步骤如下：

制备拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液经大孔树脂柱用乙醇洗脱得到乙醇提取物，乙醇提取物经浓缩后得到浸膏；

浸膏过硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从5:1,1:1v/v梯度洗脱，再用二氯甲烷:甲醇从5:1,2:1v/v梯度洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱，收集二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱下来的馏分，以此馏分进行TLC薄层层析，以二氯甲烷：甲醇＝10:1v:v作为展开剂，收集Rf值是1.8/3.5的馏分E；

馏分E以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过Sephadex LH-20，然后过正相硅胶柱层析，以体积比正己烷：乙酸乙酯10:1,5:1,2:1,1:1,1:2,1:5梯度洗脱，再用纯乙酸乙酯洗脱，最后用纯甲醇洗脱，分别收集正己烷：乙酸乙酯＝1:2,1:5v/v洗脱下来的馏分E9和E10，以馏分E9进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:2v:v作为展开剂，收集Rf值是1.2/3.5的馏分E9-1，以馏分E10进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:5v:v作为展开剂，收集Rf值是1.4/3.5的馏分E10-1；