[发明专利]一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法

权利要求书

1.一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，包括以下步骤：

(1)实验分组：将大鼠分为以高脂饲料喂养的模型组，普通饲料喂养的空白对照组，广陈皮干预高脂饲料喂养的给药组；

(2)收集大鼠的血清与尿液样本，血液样本用于检测血脂四项，尿液样本用于代谢组学分析；样品的前处理与UPLC-Q-TOF/MS检测；

(3)数据处理，比较空白对照组与模型组代谢物，筛选出高血脂模型生物标记物，与给药组对比筛选出具有降脂作用机制的特异性生物标记物；

(4)通过MetaboAnalyst在线分析软件对上述步骤获得的特异性生物标记物进行通路分析。

2.根据权利要求1所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，步骤(1)所述的高脂饲料喂养的模型组是采用每天饲喂由83.6％普通饲料、15％猪油、1.2％胆固醇和0.2％胆酸钠组成的高脂饲料的方法得到的。

3.根据权利要求1所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，所述的给药组所用的广陈皮为广陈皮水煎液，每ml含有1g生药，广陈皮每天给药量为1.04g/kg。

4.根据权利要求1所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，步骤(2)所述的大鼠血清样本是通过腹主动脉取血至真空管，离心取上清液，取自第30天的血清样本；尿液样本是收集正常对照组，模型组和广陈皮组第30天的尿样。

5.根据权利要求1所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，步骤(2)所述的样品的前处理方法如下：将大鼠血清样本以3000～3500转/分钟离心10分钟，取上清液用于全自动生化分析仪检测；尿液样本以8000～10000转/分钟离心10～15分钟以除去固体杂质，将上清液转移到EP管，并用超纯水以1∶1～2的比率稀释，再以12000～14000转/分钟离心8～12分钟，将透明上清液移至进样瓶进行UPLC-Q-TOF/MS检测分析。

6.根据权利要求5所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，所述的UPLC-Q-TOF/MS检测分析条件为：使用C18色谱柱，柱温为38～42℃，流速设定为0.25～0.35mL/min，进样体积为2.5～3.5μL，自动进样器保持在3～4℃，流动相由0.1％甲酸(A)和乙腈(B)组成；所述UPLC洗脱条件为0～10min，0～5％B；10～11min，30～50％B；11～16.5min，50～100％B；16.5～17.5min，100～5％B；17.5～19min，5～0％B。

7.根据权利要求1所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，步骤(3)所述数据处理的方法是：利用MASSLYNX 4.1软件对步骤(2)获得的UPLC-Q-TOF/MS的数据进行处理，获得数据矩阵，将数据矩阵导入SIMCA-P 14.0软件，进行无监督主成分分析和监督正交偏最小二乘判别分析，基于OPLS-DA分析的S图和VIP图，识别和揭示差异代谢物并将其在不同组之间分离，VIP值高于1.5和P值低于0.05的代谢物为高血脂模型生物标记物，根据生物标记物分子量应用Marker Lynx XS进行元素组成分析，确定分子式，进行质量数、分子式、质谱裂解信息的比对，对高血脂模型生物标记物进行结构鉴定，最后与对照品比对，确定高血脂模型生物标记物。

8.根据权利要求7所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，所述高血脂模型生物标记物具体如下所示：

9.根据权利要求1或7所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，所述的具有降脂作用机制的特异性生物标记物为：左旋肉碱、肌酐、3,4-亚甲基丁二酸、N-乙酰组氨酸、N-α-乙酰精氨酸、尿酸、泛酸、苯甲酸、乙酰半胱氨酸、吲哚乙酸、9-癸酰肉碱、油酸酰胺、MG(16:0/0:0/0:0)；所述特异性生物标记物具体如下所示：

10.根据权利要求1所述的一种基于代谢组学的降脂作用机制研究方法，其特征在于，步骤(5)所述的通路分析还包括将30个高血脂模型生物标记物导入MetaboAnalyst、KEGG数据库构建分析疾病相关代谢路径，得到相关代谢路径；广陈皮干预高血脂药效作用的关键通路主要与能量代谢、甘油酯代谢、脂肪酸代谢、嘌呤代谢、泛酸与CoA生物合成、氨基酸代谢等通路相关，并对特异性标记物MG(16:0/0:0/0:0)、泛酸和左旋肉碱表达异常有显著的回调。