[发明专利]一种用于检测遗传性耳聋的试剂盒

说明书

本发明涉及本一种用于检测遗传性耳聋的试剂盒，包括用于检测GJB2基因、GJB3基因、SLC26A4基因和线粒体12S rRNA基因中的一个或多个基因的突变的检测试剂。使用本发明的试剂盒可在同一个反应条件下同时对24个与耳聋相关基因的突变进行高通量检测。检测的特异性强，灵敏度高，最低检测限为1ng/μL，用时短，从标本送检到得出结果可在2小时以内完成。

技术领域

本发明涉及遗传性耳聋检测领域，更特别地，涉及一种用于检测遗传性耳聋的试剂盒。

背景技术

2006年中国第二次残疾人抽样调查显示：现有听力语言残疾者达2780万人，占残疾总数的35％左右，其中单纯听力残疾2004万。听力言语残疾者中7岁以下的聋儿达80万人，并以每年新增3.5万新生聋儿的速度在增长，发生率约为1-3‰。导致听力损失的病因很多，如年龄增长，噪声暴露，使用耳毒性药物及基因改变等。据统计，50％以上的耳聋患者是由遗传因素造成的。遗传性耳聋根据是否伴有耳外组织的异常或病变分为综合征型耳聋(syndromic hearing loss，SHL)和非综合征型耳聋(nonsyndromic hearing loss，NSHL)，其中NSHL占70％以上。NSHL可通过常染色体显性、常染色体隐性、X-连锁隐性，或者线粒体遗传等方式遗传给下一代。80％的耳聋孩子的父母听力正常，听力正常人群中聋病基因携带者约占6％。

目前已经有研究发现了一些与遗传性耳聋患者紧密相关的。然而，这些基因并非每个位置的任何突变都会导致耳聋，并且要逐个检测相关的突变位置也是费时费力的事情。

现阶段用于临床检测基因突变的主要方法包括直接测序、基因芯片、基因扫描、PCR-电泳、变性高效液相色谱分析(DHPLC)、荧光PCR等。这些方法或耗时长，操作复杂，或对操作者和实验场地有较高要求，导致检测费用较高，或难以同时检测多个基因的不同突变位点。

因此，有必要建立一种高通量、高效率、低成本的基因突变检测方法和产品，以实现临床快速检测以及全国人群的普遍检测。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种用于检测遗传性耳聋的试剂盒，其特征在于，包括用于检测GJB2基因、GJB3基因、SLC26A4基因和线粒体12S rRNA基因中的一个或多个基因的突变的检测试剂。

在一个优选实施方案中，所述检测试剂包括用于扩增覆盖所述基因的突变位点的引物对，以及检测所述突变位点的探针。

在一个优选实施方案中，所述GJB2基因的突变为35del G、176del16、235del C、299del AT、324C>T、167del T、508dup AACG中的一个或多个。

在一个优选实施方案中，所述GJB2基因的突变中，

用于检测35del G的引物对如SEQ ID NO 1和2所示，探针如SEQ ID NO 3和4所示；

用于检测176del 16的引物对如SEQ ID NO 5和6所示，探针如SEQ ID NO 7和8所示；

用于检测235del C的引物对如SEQ ID NO 9和10所示，探针如SEQ ID NO 11和12所示；

用于检测299del AT的引物对如SEQ ID NO 13和14所示，探针如SEQ ID NO 15和16所示；

用于检测324C>T的引物对如SEQ ID NO 17和18所示，探针如SEQ ID NO 19和20所示；

用于检测167del T的引物对如SEQ ID NO 21和22所示，探针如SEQ ID NO 23和24所示；

用于检测508dup AACG的引物对如SEQ ID NO 25和26所示，探针如SEQ ID NO 27和28所示。