[发明专利]一种犬腺病毒Ⅱ型检测试剂盒和方法

权利要求书

1.一种犬腺病毒Ⅱ型检测试剂盒，其特征在于，包括抗犬腺病毒Ⅱ型的单克隆抗体E1和E2、Tris-HCl缓冲液、包被板条、层析柱、铕标记试剂、分析缓冲液和标准品。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述铕标记试剂为Eu³⁺标记试剂盒。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述层析柱为Sephadex G-50层析柱。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述分析缓冲液为Tris-HCl、NaCl、BSA、Tween-20和NaN₃的混合溶液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述分析缓冲液为50mmol/L的Tris-HCl，每升分析缓冲液中还含有0.09％(W/V)的NaCl，0.02％(W/V)BSA，0.05％(W/V)Tween-20以及0.05％(W/V)的NaN₃。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述分析缓冲液的pH值为7.8。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品的制备方法为：用50mmol/L的Tris-HCl(pH 7.8)的标准品缓冲液将犬腺病毒抗原准确稀释成0，5，10，20，50，100ng/mL6个浓度，即得，其中，所述标准品缓冲液含有0.2％(W/V)BSA和0.1％(W/V)NaN₃。

8.一种犬腺病毒Ⅱ型的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)向包被有抗犬腺病毒抗体E1的酶联板上加入犬腺病毒抗原标准品和待测样本；

(2)向步骤(1)所得酶联板加入分析缓冲液，震荡温育，洗涤液洗涤，再加入以分析缓冲液稀释的Eu³⁺-E2标记抗体，震荡温育，洗涤液洗涤；

(3)最后加入增强液震荡后，在时间分辨荧光检测仪上进行检测。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)向包被有抗犬腺病毒抗体E1的酶联板上加入25μL犬腺病毒抗原标准品和待测样本；

(2)向步骤(1)所得酶联板加入200μL分析缓冲液，震荡温育1h，洗涤液洗涤4次，再加入以分析缓冲液1：50～100倍稀释的Eu³⁺-E2标记抗体200μL/孔，震荡温育1h，洗涤液洗涤6次；

(3)最后加入增强液200μL/孔，震荡5min后，在时间分辨荧光检测仪上进行检测。