[发明专利]一种生产丁二酸的代谢工程脱氮假单胞菌、其构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201811442844.6 | 申请日： | 2018-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN109468257A | 公开（公告）日： | 2019-03-15 |
| 发明（设计）人： | 周生芳;赵梅;张春媚 | 申请（专利权）人： | 江苏师范大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/78;C12P7/46;C12R1/38 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 周敏 |
| 地址： | 221000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脱氮假单胞菌 丁二酸 构建 乙酸 乙酰辅酶A 代谢工程 敲除 乙酰辅酶A合成酶基因 基因工程领域 代谢中间体 基因组DNA 发酵工程 好氧发酵 生物合成 乙酸代谢 原始材料 应用 基因 生产 | ||
1.一种生产丁二酸的代谢工程脱氮假单胞菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法为下列方法之一：
方法1：将脱氮假单胞菌的基因组DNA中敲除sdhAB基因；
方法2：将脱氮假单胞菌的基因组DNA中敲除sdhAB基因，并将脱氮假单胞菌来源的乙酰辅酶A合成酶基因acs在脱氮假单胞菌中过表达；
方法3：将脱氮假单胞菌的基因组DNA中敲除sdhAB基因和pta-ack基因；
方法4：将脱氮假单胞菌的基因组DNA中敲除sdhAB基因和pta-ack基因，并将脱氮假单胞菌来源的乙酰辅酶A合成酶基因acs在脱氮假单胞菌中过表达。
2.根据权利要求1所述的一种生产丁二酸的代谢工程脱氮假单胞菌的构建方法，其特征在于，所述将脱氮假单胞菌来源的乙酰辅酶A合成酶基因acs在脱氮假单胞菌中过表达具体包括：将脱氮假单胞菌来源的乙酰辅酶A合成酶基因acs构建到大肠杆菌-假单胞菌穿梭质粒pUCPK上，得到的重组质粒pUCPK-acs，然后用pUCPK-acs转化脱氮假单胞菌，得到重组的脱氮假单胞菌。
3.根据权利要求1所述的一种生产丁二酸的代谢工程脱氮假单胞菌的构建方法，其特征在于，所述假单胞菌为ATCC13867。
4.由上述任一权利要求所述的一种生产丁二酸的代谢工程脱氮假单胞菌的构建方法所构建的代谢工程脱氮假单胞菌菌株。
5.权利要求4所述的代谢工程脱氮假单胞菌菌株在生产丁二酸中的应用。
6.根据权利5中所述的代谢工程脱氮假单胞菌菌株在生产丁二酸中的应用，其特征在于，所述发酵是以乙酸为唯一原料进行好氧发酵。
7.根据权利要求6所述的代谢工程脱氮假单胞菌菌株在生产丁二酸中的应用，其特征在于，所用发酵培养基配方为：100mmol/L磷酸缓冲液、8g/L乙酸钠、0.25g/L硫酸镁、1g/L氯化铵、1g/L酵母膏；其中，磷酸缓冲液的pH＝7.0。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江苏师范大学，未经江苏师范大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811442844.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
