[发明专利]一种酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法

说明书

本发明涉及分析化学技术领域，具体地涉及一种酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，采用GC/MS衍生化的方法测定酵母培养物的代谢组成分。采用硅烷衍生化进行样品前处理。本发明设计创新，建立了GC/MS衍生化的方法测定酵母培养物的代谢组成分，采用硅烷衍生化进行样品前处理，所建方法对酵母培养物中主要代谢物种类如糖、氨基酸、醇、有机酸、烷烃等均可检出。此方法适合于酵母培养物的代谢组学研究，可为其有效物组即其生物标志物的研究提供基础，并为微生态制剂的研发及开展微生物代谢组相关研究提供了参考。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，特别是涉及一种酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法。

背景技术

酵母培养物营养丰富、成分复杂，主要由酵母代谢产物、活酵母菌、培养基3大部分组成。多年科学研究和生产应用实践证明，酵母培养物是通过其代谢产物来调节动物胃肠道中微生物区系的数量和平衡，以此来保障动物健康和提高动物生产性能的。然而其中所包含的代谢产物种类繁多,除少数已知的营养物质外,多数是以各种化合物形式存在的安全性未知成分，对此未有确切描述和解释，而且不可能每个成分都是酵母培养物的有效成分，同时也没有任何一种代谢物质能够被认为是其主要的或特定的作用成分。因此酵母培养物成分中发挥功能的主要活性成分有哪些，它们之间存在怎样的协同作用如何，是需要进一步研究确证的问题。

发明内容

本发明为了克服上述技术问题的不足，提供了一种酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，可以完全解决上述技术问题。

解决上述技术问题的技术方案如下：

一种酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，是采用GC/MS衍生化的方法测定酵母培养物的代谢组成分。

测定前，采用硅烷衍生化进行样品前处理。

具体包括以下步骤：

(1)酿酒酵母培养物按照发酵时间分成五种，分别为：A-12h、B-24h、C-36h、D-48h、E-60h；取五种酿酒酵母培养物各50mL，再取50mL培养基记作F-培养基；置于MIKRO-22R台式冷冻离心机中进行冻干48h；

(2)冻干完成后，六组样品各取0.05g；再称取达农威益康VXP粉末样品0.05g，记作G-VXP；

(3)上述七组样品分别置于5ml PE管中，每组均加入100μL的20mg/mL甲氧胺盐酸吡啶溶液，置于超声波中震荡30s，于37℃肟化反应90min；

(4)从超声波内取出，每组加入200μL的BSTFA(含1％TMCS)的衍生试剂，于70℃反应60min；

(5)将步骤(4)衍生结束后的每组样品，于10000r/min离心10min，取上清液各50vl，加入正己烷定量置0.5ml，直接注入气相色谱-质谱联用仪器进行分析；在获得TIC图后对各色谱峰成分进行识别鉴定；

其中，气相色谱条件为：色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)弹性石英毛细管柱，柱温80℃(保留3min)，以5℃/min升温至150℃，保持10min；以10℃/min升温至280℃，保持10min；载气为高纯He(99.999％)；柱前压7.62psi，载气流量1.0mL/min；进样量1μL；分流比10：1，溶剂延迟时间3min；

质谱条件为：离子源为EI源；离子源温度230℃；四极杆温150℃；电子能量70eV；接口温度280℃；质量扫描范围20～800amu。

进一步地说，步骤(5)中所述的气相色谱-质谱联用的数据预处理应用软件MSDChem station(E.02.01.1177，Agilent)，包括依据保留时间和定量离子对鉴定出化合物色谱峰进行积分并对积分结果进行数据校正；然后通过Xcalibur1.2版本软件及标准质谱数据库NIST11检索匹配结果对代谢物进行指认，鉴定化合物。