[发明专利]一种酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法

权利要求书

1.一种酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，采用GC/MS衍生化的方法测定酵母培养物的代谢组成分。

2.根据权利要求1所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，采用硅烷衍生化进行样品前处理。

3.根据权利要求1～2任一项所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)酿酒酵母培养物按照发酵时间分成五种，分别为：A-12h、B-24h、C-36h、D-48h、E-60h；取五种酿酒酵母培养物各50mL，再取50mL培养基记作F-培养基；置于台式冷冻离心机中进行冻干48h；

(2)冻干完成后，六组样品各取0.05g；再称取达农威益康VXP粉末样品0.05g，VXP粉末样品作为参考，记作G-VXP；

(3)上述七组样品分别置于5ml PE管中，每组均加入100μL的20mg/mL甲氧胺盐酸吡啶溶液，置于超声波中震荡30s，于37℃肟化反应90min；

(4)从超声波内取出，每组加入200μL的BSTFA的衍生试剂，于70℃反应60min；

(5)将步骤(4)衍生结束后的每组样品，于10000r/min离心10min，取上清液各50vl，加入正己烷定量至0.5ml，直接注入气相色谱-质谱联用仪器进行分析；在获得TIC图后对各色谱峰成分进行识别鉴定；

其中，气相色谱条件为：色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)弹性石英毛细管柱，柱温80℃(保留3min)，以5℃/min升温至150℃，保持10min；以10℃/min升温至280℃，保持10min；载气为高纯He(99.999％)；柱前压7.62psi，载气流量1.0mL/min；进样量1μL；分流比10：1，溶剂延迟时间3min；

质谱条件为：离子源为EI源；离子源温度230℃；四极杆温150℃；电子能量70eV；接口温度280℃；质量扫描范围20～800amu。

4.根据权利要求3所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤(5)中所述的气相色谱-质谱联用的数据预处理应用软件MSD Chem station(E.02.01.1177，Agilent)，包括依据保留时间和定量离子对鉴定出化合物色谱峰进行积分并对积分结果进行数据校正；然后通过Xcalibur1.2版本软件及标准质谱数据库NIST11检索匹配结果对代谢物进行指认，鉴定化合物。

5.根据权利要求4所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，还包括：化合物鉴定后，将鉴定的代谢物名称和色谱峰面积校正结果导入SIMCA.P+13.0软件(Umetrics AB，Sweden)，应用主成分分析(principal component analysis，PCA)对样品分布趋势进行分析。

6.根据权利要求3所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤(1)中所述的台式冷冻离心机为德国Hettich公司的MIKRO-22R台式低温冷冻离心机。

7.根据权利要求3所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤(1)所述的A-12h、B-24h、C-36h、D-48h、E-60h和F-培养基，均为吉林农业大学吉农博瑞奶牛饲料研发中心提供。

8.根据权利要求3所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤(3)中所述的吡啶是上海阿拉丁生化科技股份有限公司的色谱纯级吡啶；甲氧胺盐酸盐是美国Sigma-Aldrich公司的甲氧胺盐酸盐。

9.根据权利要求3所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤(4)中所述的BSTFA为含1％TMCS的N，O-双(三甲基硅烷)三氟乙酰胺；所述的TMCS为美国Sigma-Aldrich公司的三甲基氯硅烷。

10.根据权利要求3所述的酿酒酵母培养物的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤(5)中所述的气相色谱-质谱联用仪器为美国Agilent公司的Agilent7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪；正己烷为美国TEDIA公司的正己烷。