[发明专利]一种夜交藤中极性化合物的纯化制备方法

权利要求书

1.一种夜交藤中极性化合物的纯化制备方法，其特征在于：采用反相/亲水二维制备色谱从夜交藤极性组分中高效分离纯化极性化合物，第一维反相色谱采用极性共聚的碳十八柱XAqua C18，第二维亲水色谱采用两性离子键合的亲水色谱柱Click XIon，流动相由水A、甲醇B或乙腈B组成，采用甲酸作为流动相添加剂，添加剂甲酸的体积浓度为0.05%~1%；

操作步骤为：

1）夜交藤极性组分先经第一维反相高效液相色谱分离，色谱柱为极性共聚的碳十八柱，洗脱方式为线性梯度、台阶梯度，收集一维制备的馏分；

2）将一维反相制备的馏分经过第二维亲水色谱进行分离，色谱柱两性离子键合的亲水色谱柱，选择流动相对馏分进行第二维制备，获得极性化合物单体；

步骤1）中夜交藤极性组分经第一维反相高效液相色谱分离，梯度洗脱参数为：梯度时间范围为30-100min，流动相如上所述，采用线性梯度或台阶梯度进行洗脱，其中流动相B体积浓度变化为由0%~15% 到60%~100%，添加剂甲酸的比例为0.05%~1%，流速为50-100mL/min，检测器波长选择为190-400nm；采用纯水对极性组分进行溶解，得到浓度为50-100mg/mL的样品，进样量为5-20mL，根据色谱峰进行馏分收集，将每个馏分减压浓缩至干后备用，以进行第二维亲水色谱分离；

步骤2）中选取一维反相制备馏分中的代表性馏分，采用亲水色谱进行第二维制备，得到极性化合物单体；洗脱参数为：梯度时间范围为20-50min，流动相如上所述，流动相B体积浓度变化为由100%~90% 到40%~60%，添加剂甲酸的比例为0.05%~1%，流速为10-30 mL/min，检测波长为190-400nm，柱温为30℃分别收集每个馏分中的色谱峰，并进行浓缩，经核磁实验确定，获得极性化合物单体。

2.按照权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于：色谱操作参数如下：色谱柱内径为4.6-50 mm。

3.按照权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于：所述夜交藤极性组分的制备方法为：称取0.5公斤~100公斤的夜交藤药材粉末，用5~30倍量的50%~95%乙醇溶液在50-100℃加热回流提取1-5次，每次回流提取的时间为1-3小时，合并提取液抽滤，用旋转蒸发仪40~80℃条件下减压回收乙醇，得到固体粗提物；将固体粗提物用水溶解后，采用氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯进行萃取，除去弱极性成分，收集水层，40~80℃条件下减压浓缩得到固体，采用50%~95%乙醇对固体复溶，将复溶样品上固相萃取柱：30μm~60μm，进行前处理，用3-5倍柱体积0%-10%的0.1%~5%甲酸-水和甲醇洗脱，收集洗脱液，40~80℃减压浓缩，得到固体样品；之后，采用碳十八柱对该固体样品进行制备，采用5%-90%甲醇-水进行线性梯度或台阶梯度洗脱，添加剂甲酸的比例为0.05%~1%，流速为50-100mL/min，检测器波长选择为190-400nm；采用体积浓度为5%-40%二甲基亚砜-水混合溶剂对该固体样品进行溶解，得到浓度为100-1000mg/mL的样品，进样量为1-5mL，收集在“死时间”流出的馏分，40~80℃减压浓缩，得到固体样品，为夜交藤的极性成分。