[发明专利]一种利用人参内生菌转化人参皂苷Rb1为稀有人参皂苷的方法在审
| 申请号： | 201811430314.X | 申请日： | 2018-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN109536561A | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 雷锋杰;张爱华;陈长宝;张连学 | 申请（专利权）人： | 吉林农业大学;长春中医药大学 |
| 主分类号： | C12P33/20 | 分类号： | C12P33/20;C12R1/77 |
| 代理公司： | 长春众益专利商标事务所(普通合伙) 22211 | 代理人： | 赵正 |
| 地址： | 130000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人参皂苷 内生菌 人参 转化 配制 微生物技术领域 环境因素影响 固体培养基 液体培养基 生长周期 皂苷 生长 生产 | ||
1.一种利用人参内生菌转化人参皂苷Rb1为稀有人参皂苷的方法，其特征在于由以下步骤现实：
⑴液体培养基的配制
取成品V8汁饮料，经离心及过滤，取上清液200-300mL，向其中加入2-4g CaCO3，补足水至1000mL，得到液体培养基；
⑵固体培养基的配制
取成品V8汁饮料，经离心及过滤，取上清液200-300mL，向其中加入2-4g CaCO3及琼脂粉15-20g，补足水至1000mL，得到固体培养基；
⑶人参内生菌F1的培养
取人参内生菌打成菌饼块，所述的人参内生菌为Fusarium oxysporum，将菌饼接种于固体培养基平板的中心，28℃培养，6-9天后刮取平板上的菌丝移到100mL液体培养基的三角瓶中，28℃、130r/min往复摇床培养8-10天，得到人参内生菌F1的培养液；
⑷人参主皂苷Rb1转化方法
向含有人参内生菌F1的培养液的三角瓶中加入已灭菌的玻璃珠，再将该三角瓶放在摇床中，200rpm室温振荡1-2h，在无菌环境下过滤菌液，此菌液含有孢子；先将含有孢子的菌液按上述振荡条件下培养24h后，加入人参单体皂苷Rb1溶液，最后使人参内生菌F1菌液的孢子最终浓度为3-5×106个/mL及人参皂苷Rb1底物浓度为0.25mg/mL，继续振荡培养5-10天，得到稀有人参皂苷CK。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于由以下步骤现实：
(1)液体培养基的配制
取成品V8汁饮料，经离心及过滤，取上清液200mL，向其中加入2g CaCO3，补足水至1000mL，得到液体培养基；
(2)固体培养基的配制
取成品V8汁饮料，经离心及过滤，取上清液200mL，向其中加入2g CaCO3及琼脂粉18g，补足水至1000mL，得到固体培养基；
(3)人参内生菌F1的培养
取人参内生菌打成菌饼块，所述的人参内生菌为Fusarium oxysporum，将菌饼接种于固体培养基平板的中心，28℃培养，8天后刮取平板上的菌丝移到100mL液体培养基的三角瓶中，28℃、130r/min往复摇床培养9天，得到人参内生菌F1的培养液；
(4)人参主皂苷Rb1转化方法
向含有人参内生菌F1的培养液的三角瓶中加入已灭菌的玻璃珠，再将该三角瓶放在摇床中，200rpm室温振荡1.5h，在无菌环境下过滤菌液，此菌液含有孢子；先将含有孢子的菌液按上述振荡条件下培养24h后，加入人参单体皂苷Rb1溶液，最后使人参内生菌F1菌液的孢子最终浓度为3-5×106个/mL及人参皂苷Rb1底物浓度为0.25mg/mL，继续振荡培养10天，得到稀有人参皂苷CK。
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