[发明专利]一种烟草及烟草制品中异菌脲的高效液相色谱-质谱的测定方法

说明书

一种烟草及烟草制品中异菌脲的高效液相色谱‑质谱的测定方法，其特征在于：用碱性溶液将样品中的异菌脲全部分解成代谢物[异菌脲脱‑（N‑异丙基甲酰胺）]，盐酸酸化后，用二氯甲烷液液萃取，过滤，氮吹近干后用乙腈复溶，以液相色谱‑质谱测定样品中异菌脲代谢物的含量，从而间接测定样品中异菌脲的总量。本发明的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，填补了该类物质测定的空白，能够为相关残留限量的测定和方法技术的开发提供诸多借鉴，针对烟草样品优化了样品前处理方法和仪器检测条件，与现有技术相比本发明方法具有如下优良效果：本发明方法样品前处理过程简单、快速，具有操作准确、灵敏度高及重复性好的优点。

技术领域

本发明属于烟草制品中农药残留的理化检验技术领域，主要涉及烟草中异菌脲残留量的测定技术，具体说是用碱性溶液将样品中的异菌脲全部分解成代谢物[异菌脲脱-（N-异丙基甲酰胺）]，酸化后，用二氯甲烷液液萃取，过滤，以液相色谱-质谱测定样品中异菌脲代谢物的含量，从而间接测定样品中异菌脲的含量。

背景技术

烟草作为吸食品，其农药残留量问题已成为吸烟安全性问题中的重要组成部分，烟草及烟草制品农药残留量指标是各国在烟草制品质量控制中的重要内容，已成为国际市场烟叶评价和选购的重要因素，也是烟草国际贸易中进行商品检验的重要内容。异菌脲（iprodione）， 又名扑海因， 属于二甲酰亚胺类，是一种广谱性触杀型保护性杀菌剂。该杀菌剂对病原真菌生活史中的各发育阶段均有影响， 广泛用于果树、蔬菜、谷物的病害防治和水果的贮藏保鲜。适宜于叶面喷雾防治番茄灰霉病、早疫病和苹果斑点落叶病等蔬菜和水果病害。目前， 中国制定异菌脲在烟草、黄瓜和番茄上的MRL（最大残留限量）值分别为0.1、2.0 和5.0 mg/kg。目前异菌脲残留量的检测多采用GC-MS，HPLC、HPLC-MS方法，前处理方法主要有液液萃取、固相萃取、基质分散固相萃取。这些方法均是以异菌脲为检测对象，但是在样品中异菌脲容易分解，生成异菌脲脱-（N-异丙基甲酰胺）【中国农学通报，2017,33:150-153,异菌脲在杨梅果实中的残留消解动态研究】，因此仅仅检测样品中异菌脲的含量并不能准确的评估样品中异菌脲的残留。本发明的测定方法正是基于此而提出的。

发明内容：

本发明的目的旨在针对烟草基质情况复杂，样品种类多等现状，克服现有技术缺陷，提供一种液液萃取与基质配标法相结合，直接以液相色谱-质谱测定烟草制品中异菌脲代谢物残留量的测定方法，从而间接测定样品中异菌脲的含量。该方法能快速、准确检测烟草中异菌脲残留总量，测定结果准确、测定干扰少。

本发明的机理是在碱性环境中将样品中的异菌脲全部转化为异菌脲脱-（N-异丙基甲酰胺），通过测定异菌脲脱-（N-异丙基甲酰胺）的含量间接测定了样品中异菌脲的总量，方法简便，为烟草中异菌脲残留量测定提供了新的思路。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种烟草及烟草制品中异菌脲的高效液相色谱-质谱的测定方法，用碱性溶液将样品中的异菌脲全部分解成其代谢物即异菌脲脱-（N-异丙基甲酰胺），盐酸酸化后，用二氯甲烷液液萃取，过滤，氮吹近干后用乙腈复溶，以液相色谱-质谱测定样品中异菌脲代谢物的含量，从而间接测定样品中异菌脲的含量。具体包括以下步骤：

a、样品的提取：准确称取1.0 g样品（精确至0.01 g）于50 mL具盖离心管中。加入0.2 moL/L的氢氧化钠溶液18 mL，然后将离心管置于涡漩混合振荡仪上，以2000 rpm 速率振荡2 min。然后放置于90℃的水浴锅中水浴30 min。冷却至室温，加入质量分数为30%的盐酸溶液2.0 mL,混匀，再加入10 mL二氯甲烷，以2000 rpm 速率振荡2 min。吸取下层清液1mL,氮吹近干后用1.0 mL乙腈复溶，经0.45 μm有机相滤膜过滤，用LC-MS检测；