[发明专利]一种烟草及烟草制品中异菌脲的高效液相色谱-质谱的测定方法

权利要求书

1.一种烟草及烟草制品中异菌脲的高效液相色谱-质谱的测定方法，其特征在于：用碱性溶液将样品中的异菌脲全部分解成其代谢物即异菌脲脱-（N-异丙基甲酰胺），盐酸酸化后，用二氯甲烷液液萃取，过滤，氮吹近干后用乙腈复溶，以液相色谱-质谱测定样品中异菌脲代谢物的含量，从而间接测定样品中异菌脲的含量；

采用的液相色谱条件为：色谱柱：Atlantis T3，规格150 mm×2.1mm，3.0 μm；流动相A：0.1%甲酸乙腈溶液；流动相B: 0.1%甲酸水溶液；等度洗脱，流动相A:流动相B=4:1；流速：0.2 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；采用的质谱条件：扫描方式：负离子扫描; 电喷雾离子源(ESI)；雾化气流量为60 psi; 气帘气流量20 psi；辅助加热气流量为60 psi；离子化温度500 ℃；停留时间为100 msec；电离电压5500 V，Q1扫描模式采集。

2.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中异菌脲的高效液相色谱-质谱的测定方法，其特征在于：该测定方法具体步骤如下：

a、样品的提取：准确称取1.0 g样品于50 mL具盖离心管中，加入0.2 moL/L的氢氧化钠溶液18 mL，然后将离心管置于涡漩混合振荡仪上，以2000 rpm 速率振荡2 min，然后放置于90℃的水浴锅中水浴30 min，冷却至室温，加入质量分数为30%的盐酸溶液2.0 mL,混匀，再加入10 mL二氯甲烷，以2000 rpm 速率振荡2 min，吸取下层清液1mL,氮吹近干后用1.0mL乙腈复溶，经0.45 μm有机相滤膜过滤，用LC-MS检测；

b、标准工作溶液制备：称取10 mg异菌脲代谢物标准品于10 mL容量瓶中，根据标准品的溶解度选用乙腈进行溶解并定容至刻度，配制成一级标准储备液；移取1.0 mL标准储备液于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，得到二级标准储备液；标准储备液在避光、-18℃下保存；移取不同体积的二级标准储备液，并用空白样品提取液稀释并最终配制成具有浓度梯度的标准工作溶液；

c、液相色谱-质谱测定:吸取以上配制好的不同浓度的标准工作溶液，注入液相色谱-质谱仪；

d、农药残留量测定结果的计算：

以外标法进行残留量的定量分析，即以异菌脲代谢物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，相关系数大于等于0.99,对提取后的样品进行测定，测得目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，求得样品中的异菌脲代谢物的残留量，从而根据公式计算得到异菌脲的含量。

3.根据权利要求2所述的烟草及烟草制品中异菌脲的高效液相色谱-质谱的测定方法，其特征在于：步骤b中最终配制成的具有浓度梯度的标准工作溶液配制方式如下：分别移取二级标准储备液25μL，50μL，100μL，250μL，500μL 及1000μL到6个10 mL容量瓶中，用空白样品提取液定容。