[发明专利]一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法

说明书

本发明实施例公开了一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)获取高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜，再将细胞膜和硅胶制备得到细胞膜色谱柱；(b)将待测样品置入细胞膜色谱柱内，采用洗涤液进行洗涤，再采用洗脱液进行洗脱，并收集洗脱液；(c)采用高效液相色谱法分离检测洗脱液中物质，所得物质即为MEK1蛋白潜在的抑制剂。本发明通过将细胞膜和硅胶制备得到细胞膜色谱柱，使得细胞膜色谱柱不仅具有色谱的分离能力，同时兼具生物活性，使得本发明筛选方法具有较强的特异性，能够实现对MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选。

技术领域

本发明实施例涉及分析化学技术领域，具体涉及一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法。

背景技术

二十世纪以来人类的生活环境污染日趋加剧、生活环境不断恶化、人们与致癌因素的接触越来越紧密，恶性肿瘤的发明率液逐年递增，恶性肿瘤已经超过心脑血管成为人类健康的最大敌人。

据北美癌症中心的最新数据显示，美国2017年新增癌症患者173万例，死亡人数约为61万人。GLOBOCAN统计显示，2012年全球共新增癌症患者1410万例，死亡人数约为820万人。中国癌症中心的汇总数据显示，中国每年新增约300万例癌症患者，肺癌、胃癌、肝癌、食管癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌等是中国发病率较高的癌症类型。

目前，天然药物在癌症治疗中做出巨大的贡献，在抗癌药物中的占比高达27％左右，如紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、榄香烯等等。虽然，已发现诸多具有抗肿瘤活性的成分，但由于特定靶向筛选方法的匮乏，导致抗肿瘤活性成分的作用机制和抑制靶点的研究存在极大的不足。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法，以解决现有技术中由于特定靶向筛选方法的匮乏而导致的抗肿瘤活性成分的作用机制和抑制靶点的研究存在极大的不足的问题。

为了实现上述目的，本发明的实施方式提供如下技术方案：

在本发明的实施方式的第一方面中，提供了一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤：

(a)获取高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜，再将细胞膜和硅胶制备得到细胞膜色谱柱；

(b)将待测样品置入细胞膜色谱柱内，采用洗涤液进行洗涤，再采用洗脱液进行洗脱，并收集洗脱液；

(c)采用高效液相色谱法分离检测洗脱液中物质，所得物质即为 MEK1蛋白潜在的抑制剂。

本发明上述筛选方法通过将细胞膜和硅胶制备得到细胞膜色谱柱，使得细胞膜色谱柱不仅具有色谱的分离能力，同时兼具生物活性，使得本发明筛选方法具有较强的特异性；此外，通过选择高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜，保障了细胞膜上MEK1蛋白的含量，提高了本发明筛选方法的灵敏度；另外，本发明筛选方法操作简单，并能够实现快速分离。

本发明对高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜的获取方法不做严格限制，例如可以通过本领域的常规方法获取得到；优选地，通过如下方法得到：

选取高表达MEK1蛋白的细胞悬液，在800-1200r/min、4℃下离心 8-12min，收集沉淀得到高表达MEK1蛋白的细胞；再采用生理盐水清洗高表达MEK1蛋白的细胞2-3遍；随后，加入45-55mM Tris-Hcl溶液，超声处理25-35min进行细胞破碎；将破碎后的细胞悬液在800-1200r/min、 4℃下离心4-6min，收集上清液并在10000-14000r/min、4℃下离心 18-22min，收集沉淀得到高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜。

在本发明的一个实施例中，所述高表达MEK1蛋白的细胞株为A549 细胞株。

进一步地，所述高表达MEK1蛋白的细胞株通过如下步骤制备得到：