[发明专利]一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法有效
| 申请号： | 201811428911.9 | 申请日： | 2018-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN109765324B | 公开（公告）日： | 2021-03-30 |
| 发明（设计）人： | 郭伟强 | 申请（专利权）人： | 苏州科技大学 |
| 主分类号： | G01N30/88 | 分类号： | G01N30/88;C12N15/54;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 武媛;吕学文 |
| 地址： | 215000 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 mek1 蛋白 潜在 抑制剂 筛选 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种MEK1蛋白潜在抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)获取高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜，再将细胞膜和硅胶制备得到细胞膜色谱柱；
(b)将待测样品置入细胞膜色谱柱内，采用洗涤液进行洗涤，再采用洗脱液进行洗脱，并收集洗脱液；
(c)采用高效液相色谱法分离检测洗脱液中物质，所得物质即为MEK1蛋白潜在的抑制剂；
所述细胞膜色谱柱通过采用磷酸盐缓冲液重悬细胞膜，随后，向细胞膜悬液中添加硅胶，搅拌均匀，静置过夜，湿法装柱得到所述细胞膜色谱柱，所述细胞膜中蛋白含量与硅胶质量比为1∶(80-100)；
所述洗涤采用的洗涤液体积为3-5个柱体积且洗涤速度为1-2ml/min，所述洗涤液为pH7.0的磷酸盐缓冲液；
所述洗脱采用洗脱液的体积为3-5个柱体积且洗脱速度为1-2ml/min，所述洗脱液为pH3-4的磷酸盐缓冲液；
所述高表达MEK1蛋白的细胞株为A549细胞株；
所述高表达MEK1蛋白的细胞株通过如下步骤制备得到：
在表达MEK1蛋白的细胞中，采用基因工程方法得到表达MEK1蛋白的基因，将基因克隆至真核表达载体上，再将真核表达载体转染至表达MEK1蛋白的细胞中，对转染细胞进行稳定筛选得到高表达MEK1蛋白的细胞株；
所述高表达MEK1蛋白的细胞株的细胞膜中MEK1蛋白含量为不小于100pg/ml。
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