[发明专利]一种异紫草酸的制备方法

权利要求书

1.一种异紫草酸的制备方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

步骤1：异紫草酸的富集；取丹参酚酸提取物，用水溶解，加入反向色谱柱中，用乙醇水溶液洗脱，再次用反向色谱柱固相萃取，用95%乙醇洗脱，洗脱液浓缩至干得到异紫草酸富集物；

步骤2：异紫草酸粗品的制备；异紫草酸富集物去除色素，得到异紫草酸粗品；

步骤3：异紫草酸纯品的制备；采用ODS色谱柱进一步分离纯化得到高纯度异紫草酸单体，所得纯品经干燥即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中步骤1、异紫草酸的富集，方法如下：

取丹参酚酸提取物，用1-3倍量的水溶解，加入反向色谱柱中，然后用8-15%乙醇水溶液洗脱，下接液调节pH值为酸性，再次用反向色谱柱固相萃取，然后用95%乙醇洗脱，收集下接液，浓缩至干得到异紫草酸富集物。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中步骤3：异紫草酸纯品的制备，方法如下：

用乙腈溶解粗品，采用ODS色谱柱分离，流动相为乙腈和含0.01%甲酸的水溶液，体积比为23：77-30：70，流速为4-8BV/h，比照丹参酚酸提取物指纹图谱，收集含异紫草酸的洗脱液，减压浓缩干燥，即得。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，

其中步骤1中，反向色谱柱为MCI Gel色谱柱、聚酰胺色谱柱、ODS-C18色谱柱或LH-20凝胶色谱柱；

其中，第一次加入反向色谱柱中，提取物与填料的重量体积比为1：60-1：20；再次用反向色谱柱固相萃取，提取物与填料的重量体积比为1:6-1:3；

所述下接液，第一次柱子洗脱液需要检测，用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物的指纹图谱对照，收集含有异紫草酸的洗脱液；第二次直接收集乙醇洗脱液，

其中，所述调节pH值的调节剂为甲酸或盐酸；pH值至3.0-4.5。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，其中步骤1中，反向色谱柱为MCI Gel色谱柱。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

其中步骤2中，去除色素方法为LH20凝胶柱层析或活性炭脱色。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，其中步骤2中，去除色素方法为LH-20凝胶柱层析；当LH20凝胶柱层析去除色素时，用1-3倍质量体积的45-55%乙醇水溶液完全溶解，加入LH20凝胶柱层析中，用45-55%乙醇洗脱，流速：0.08-0.12BV/h，参考丹参酚酸提取物指纹图谱对照，合并含有异紫草酸的粗品。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、异紫草酸的富集

取丹参酚酸提取物，用1-3倍量的水溶解，加入反向色谱柱中，上样量与色谱柱填料的体积比为1：60-1：20，上样速度为1-3 BV/h，然后用8-15%乙醇水溶液洗脱，流速为1-3%，下接液调节pH值2.5-5，再次用反向色谱柱固相萃取，提取物与色谱柱填料的体积比为1:6-1：3，用95%乙醇洗脱，流速1-3BV/h，收集洗脱液，浓缩至干得到异紫草酸富集物；

步骤2：异紫草酸粗品的制备

异紫草酸富集物去除色素，得到异紫草酸富集物粗品；

步骤3：异紫草酸纯品的制备

用乙腈溶解粗品，乙腈和粗品的质量体积比为1-3：1，采用ODS色谱柱分离，流动相为乙腈和含0.01%甲酸的水溶液，体积比为23：77-30：70，流速为4-8BV/h，比照丹参酚酸提取物指纹图谱，收集含异紫草酸的洗脱液，减压浓缩干燥。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：异紫草酸的富集

取丹参酚酸提取物，2倍质量体积的水溶解，加入MCI Gel色谱柱中,每次上样提取物量-MCI-Gel填料1:60-1:20，流速：2 BV/h，上样结束后用10%乙醇水溶液洗脱，流速：2 BV/h，每1/10 BV接一个样品；

用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物的指纹图谱对照，合并含有异紫草酸的洗脱液，调节洗脱液pH值至3.0-4.5，再次加入MCI Gel色谱柱中，提取物-MCI-Gel填料1:6-1:3，用水洗涤5 BV，洗脱液弃去，流速：2 BV/h，之后用95%乙醇洗脱，流速：2 BV/h，收集洗脱液2BV，回收溶剂，浓缩至干得到异紫草酸富集物；

步骤2：异紫草酸粗品的制备

异紫草酸富集物用2倍质量体积的50%乙醇水溶液完全溶解，加入LH20凝胶柱层析中，用50%乙醇洗脱，流速：0.1BV/h ，每500ml接一个洗脱液，用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物指纹图谱对照，合并含有异紫草酸的粗品；

步骤3：异紫草酸纯品的制备

异紫草酸粗品用2倍质量体积的乙腈水溶液完全溶解，ODS色谱柱分离，流动相：乙腈-含0.01%甲酸的水溶液，体积比为23:77-30:70，流速6BV/h，每1/4BV接一个样品，用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物指纹图谱对照，合并含有异紫草酸的洗脱液，减压浓缩干燥得到异紫草酸单体，60℃减压干燥12小时。