[发明专利]一种脱抗原肌腱处理方法

说明书

本发明公开了一种脱抗原肌腱处理方法，包括如下步骤：(1)取离体新鲜肌腱，使用生理盐水洗净血污、杂质；(2)将肌腱浸泡于PBS缓冲液中，震荡过夜，生理盐水清洗；(3)将肌腱浸泡于含有羟乙基淀粉和硫酸软骨素的浸泡液中，进行阶段性加压处理1‑2次；(4)对加压处理后的肌腱进行脱抗原处理；(5)对肌腱进行辐照灭菌。本发明通过PBS预处理、阶段性加压处理、脱抗原处理及辐照灭菌过程中各参数的相互配合，有效去除肌腱所附抗原物质，并且保证了肌腱的力学强度、生物相容性，降低了肌腱的细胞毒性。

技术领域

本发明涉及医用材料领域，更具体的说是涉及一种脱抗原肌腱处理方法。

背景技术

肌腱是肌腹两端的索状或膜状致密结缔组织，用于肌肉附着和固定。一块肌肉的肌腱分附在两块或两块以上的不同骨上，通过肌腱的牵引作用使肌肉的收缩带动不同骨的运动。

年老、血液损伤均会导致组成肌腱的胶原纤维发生退变，而高强度运动也可能导致肌腱损伤，进而影响人的正常运动，因此，临床上需要大量的肌腱修复材料对受损部位进行重建修复。然而，人工合成材料往往达不到天然组织来源的耐用性标准，而同种肌腱来源受限，因此，研究人员逐渐关注于异种肌腱的研究。而异种肌腱的抗原性是研究过程中最难克服的问题，脱抗原过程往往会影响肌腱力学性能、生物相容性，增加细胞毒性；因此，如何提供一种脱抗原效果好，且对力学强度、生物相容性、细胞毒性影响较小的肌腱处理方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种脱抗原肌腱处理方法，其脱抗原效果好，获得的脱抗原肌腱与成骨细胞具有良好的相容性，且细胞毒性低。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种脱抗原肌腱处理方法，包括如下步骤：

(1)取离体新鲜肌腱，使用生理盐水洗净血污、杂质；

(2)将肌腱浸泡于PBS缓冲液中，震荡过夜，生理盐水清洗；

(3)将肌腱浸泡于含有羟乙基淀粉和硫酸软骨素的浸泡液中，进行阶段性加压处理1-2次；

(4)对加压处理后的肌腱进行脱抗原处理；

(5)对肌腱进行辐照灭菌。

先使用PBS缓冲液对肌腱进行浸泡处理，脱除部分抗原物质，有利于后续浸泡液成分的浸入，并且可提高后续脱抗原处理的效率；将PBS预处理后的肌腱浸泡于浸泡液中，并进行阶段性加压，一方面促进抗原物质的脱除，一方面将浸泡液成分浸入肌腱胶原纤维结构内部，进而降低脱抗原过程中肌腱的力学损伤，提高肌腱的生物相容性，促进后续肌腱修复过程中的快速愈合。

优选地，步骤(2)中震荡过夜条件为37℃，200-400rpm，进而保证预处理的效果。

优选地，步骤(3)中肌腱与浸泡液的比例为10-20g肌腱/100ml浸泡液，保证浸泡液成分的充分浸入，并且减少浸泡液成分的浪费。

进一步优选地，进行第2次阶段性加压处理之前需更换浸泡液。

优选地，阶段性加压过程控制温度为4℃，进而降低加压过程对肌腱结构的影响。

优选地，阶段性加压处理程序如下：

1)0.5-5MPa，2-4h；

2)15-25MPa，10-15min；

3)35-40MPa，2-5min。

阶段性加压对肌腱的结构损伤较小，且浸泡液成分浸入效果好。

进一步优选地，阶段性加压处理程序如下：

1)1.5MPa，2.5h；