[发明专利]以博落回叶片原液为底物合成血根碱和白屈菜红碱的方法

权利要求书

1.一种以博落回叶片原液为底物合成血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于，是一种将博落回叶片原液直接进行生物转化，使原液中的原阿片碱与别隐品碱转化成高价值的血根碱与白屈菜红碱的方法，具体包括如下步骤：

S1、博落回叶片原液前处理，具体如下：

（1）将博落回叶片放于35～45℃的恒温干燥箱中烘干，并粉碎得叶片粉末备用；

（2）将步骤（1）制得的叶片粉末按比例加入一定体积pH=8.0的TE缓冲溶液中，配置呈一定比例的缓冲液，即前体溶液；前体溶液中叶片粉末的浓度为0.2～0.8g/mL；将所述前体溶液放入高压蒸汽灭菌锅中110～120℃灭菌25～35 min或者放入超声波清洗器中超声25～35 min；

（3）之后，将所述前体溶液4500～5500rpm离心4～6 min，上清液过0.2～0.25μm滤膜，即得；

S2、构建酵母工程菌：将博落回普罗托品-6-羟基化酶基因与辅酶基因CPR、二氢苯并菲啶氧化酶基因一起构建到表达载体上，然后转入酵母工程菌中，并进行转化，获得重组酵母工程菌株；

所述普罗托品-6-羟基化酶（P6H）基因包括MC11229、MC11218及MC11229opt，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、 SEQ ID No.3所示；

所述二氢苯并菲啶氧化酶（DBOX）基因包括MC6408、MC6407以及MC6408 opt，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6所示；

所述辅酶基因包括CuCPR，其核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；

S3、以步骤S1前处理后的博落回叶片原液作为底物，前体饲喂步骤S2构建的酵母工程菌，温度30℃ 下，发酵培养24小时；

S4、收集步骤S3培养后的酵母工程菌，裂解菌体、分离纯化，即得血根碱和白屈菜红碱。

2.根据权利要求1所述的以博落回叶片原液为底物合成血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于，所述表达载体的质粒选自PYES2。

3.根据权利要求1所述的以博落回叶片原液为底物合成血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于，所述酵母工程菌株的宿主菌选自酵母菌株ivf。