[发明专利]用于光漂白染色细胞的方法

权利要求书

1. 一种用于检测生物样本的样品中的靶部分的方法，其通过以下进行：

a) 提供至少一种具有通式(I) X_n – P – Y_m的缀合物，其中X是荧光部分，Y是抗原识别部分，n、m是在1和100之间的整数，P是包含根据通式I的聚乙二醇的间隔基

(R₇CH₂CHR₅O)-(CR₁R₂CR₃R₄O)_o-(CH₂CHR₆R₈) (I)

其中R₁至R₈独立地为H或具有至少1个且最大20000个重复单元的乙二醇的支链或直链低聚物或与Y或X的共价键，条件是R₁至R₈中的至少两个是与Y或X的共价键

且o是1-500的整数；

b) 使生物样本的样品与至少一种缀合物接触，从而用缀合物标记被抗原识别部分Y识别的靶部分；

c) 用波长在荧光部分X的吸收光谱内的光激发该标记的靶部分；

d) 通过检测由荧光部分发射的荧光辐射来检测该标记的靶部分；和

e) 通过用波长在荧光部分X的吸收光谱内的光辐射缀合物，持续足以传递足够的能量以将由荧光部分发射的荧光辐射降低初始荧光辐射的至少75％的时间，来降解该标记的靶部分的荧光部分X。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述缀合物是根据通式II的化合物：

其中Z =至少一个荧光部分X和至少一个抗原识别部分Y；p是2至500的整数。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述缀合物是根据通式III的化合物：

其中Z =至少一个荧光部分X和至少一个抗原识别部分Y；p是2至500的整数。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于荧光部分X选自呫吨染料、罗丹明染料、香豆素染料、花青染料、芘染料、噁嗪染料、吡啶基噁唑染料和吡咯亚甲基染料。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于荧光部分X被一种或多种赋予水溶性的取代基取代，所述赋予水溶性的取代基选自磺酸酯、膦酸酯、磷酸酯、磺酰胺、聚醚和碳酸酯。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于抗原识别部分Y是至少一种选自免疫球蛋白、抗体、片段化抗体、Fab、Fab'、F(ab')₂、sdAb、scFv、di-scFv的生物分子，各自具有天然或重组来源。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于抗原识别部分Y是至少一种选自肽/MHC-复合物、细胞粘附或共刺激分子的受体、受体配体、抗原、半抗原结合剂、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、中性抗生物素蛋白、适配子、引物和连接酶底物的生物分子。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于抗原识别部分Y是抗体、片段化抗体、片段化抗体衍生物、靶向TCR分子的肽/MHC-复合物、细胞粘附受体分子、共刺激分子的受体或人工工程化结合分子。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于通过提供至少两种缀合物重复步骤a)-d)，其中每种抗原识别部分Y识别不同的抗原。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于在步骤e)中标记的靶部分的荧光部分X通过添加氧化剂进一步降解。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法在荧光显微术、流式细胞术、荧光分光光度法、细胞分离、病理学或组织学中的用途。