[发明专利]一种泪腺干细胞、泪腺干细胞的培养体系和培养方法有效

专利信息
申请号: 201811415998.6 申请日: 2018-11-26
公开(公告)号: CN109486766B 公开(公告)日: 2021-05-07
发明(设计)人: 张雁;肖洒 申请(专利权)人: 中山大学
主分类号: C12N5/0797 分类号: C12N5/0797
代理公司: 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 代理人: 李小林;李海恬
地址: 510275 广东*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 泪腺 干细胞 培养 体系 方法
【权利要求书】:

1.一种泪腺干细胞的培养体系,其特征在于,以DMEM/F12为基础培养基,添加以下组分构成培养液:细胞培养添加剂、非必需氨基酸、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路配体、成纤维细胞生长因子、Wnt信号通路配体和ROCK信号通路抑制剂的组合物,并以基质胶作为立体培养的支架;

所述细胞培养添加剂为N2和B27的混合物;或,所述细胞培养添加剂为9F,所述9F为β-巯基乙醇、2-氨基乙醇、亚硒酸钠、肝素、转铁蛋白、维生素C、胰岛素、牛血清白蛋白-油酸和成纤维细胞生长因子-2的混合物;

所述丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路配体为EGF,所述成纤维细胞生长因子为FGF10,所述Wnt信号通路配体为Wnt3A,所述ROCK信号通路抑制剂为Y-27632;

所述细胞培养添加剂中N2体积浓度为0.5%-1%,B27体积浓度为1%-2%;

所述细胞培养添加剂9F中各组分浓度为:β-巯基乙醇5-10μM、2-氨基乙醇5-10μM、亚硒酸钠10-20μM、肝素50-150ng/ml、转铁蛋白2-5ng/ml、维生素C 5-10ng/ml、胰岛素5-10ng/ml、牛血清白蛋白-油酸6.8-9.4ng/ml和成纤维细胞生长因子-2 5-10ng/ml;

所述非必需氨基酸浓度为1%,所述L-丙氨酰-L-谷氨酰胺浓度为1%;

所述EGF浓度为10-50ng/ml,FGF10浓度为10-100ng/ml,Wnt3A浓度为5-10ng/ml,Y-27632浓度为5-10mM。

2.根据权利要求1所述的泪腺干细胞的培养体系,其特征在于,所述基质胶为Matrigel。

3.一种泪腺干细胞的培养方法,其特征在于,将小鼠泪腺组织消化成单细胞接种到基质胶中,待其凝固后,加入如权利要求1-2任一项所述泪腺干细胞培养液中,在37℃、5%~10%CO2环境下进行培养。

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