[发明专利]一种泪腺干细胞、泪腺干细胞的培养体系和培养方法

权利要求书

1.一种泪腺干细胞的培养体系，其特征在于，以DMEM/F12为基础培养基，添加以下组分构成培养液：细胞培养添加剂、非必需氨基酸、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路配体、成纤维细胞生长因子、Wnt信号通路配体和ROCK信号通路抑制剂的组合物，并以基质胶作为立体培养的支架；

所述细胞培养添加剂为N2和B27的混合物；或，所述细胞培养添加剂为9F，所述9F为β-巯基乙醇、2-氨基乙醇、亚硒酸钠、肝素、转铁蛋白、维生素C、胰岛素、牛血清白蛋白-油酸和成纤维细胞生长因子-2的混合物；

所述丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路配体为EGF，所述成纤维细胞生长因子为FGF10，所述Wnt信号通路配体为Wnt3A，所述ROCK信号通路抑制剂为Y-27632；

所述细胞培养添加剂中N2体积浓度为0.5％-1％，B27体积浓度为1％-2％；

所述细胞培养添加剂9F中各组分浓度为：β-巯基乙醇5-10μM、2-氨基乙醇5-10μM、亚硒酸钠10-20μM、肝素50-150ng/ml、转铁蛋白2-5ng/ml、维生素C 5-10ng/ml、胰岛素5-10ng/ml、牛血清白蛋白-油酸6.8-9.4ng/ml和成纤维细胞生长因子-2 5-10ng/ml；

所述非必需氨基酸浓度为1％，所述L-丙氨酰-L-谷氨酰胺浓度为1％；

所述EGF浓度为10-50ng/ml，FGF10浓度为10-100ng/ml，Wnt3A浓度为5-10ng/ml，Y-27632浓度为5-10mM。

2.根据权利要求1所述的泪腺干细胞的培养体系，其特征在于，所述基质胶为Matrigel。

3.一种泪腺干细胞的培养方法，其特征在于，将小鼠泪腺组织消化成单细胞接种到基质胶中，待其凝固后，加入如权利要求1-2任一项所述泪腺干细胞培养液中，在37℃、5％～10％CO₂环境下进行培养。