[发明专利]一种发酵液中3-羟基丁酮定量测定的方法

权利要求书

1.一种发酵液中3-羟基丁酮定量测定的方法，其特征在于，包括步骤：

1）绘制标准曲线

①制备3-羟基丁酮标准溶液；

②配制3,5-二硝基水杨酸试剂；

将3,5-二硝基水杨酸和NaOH溶液，加入到含有酒石酸钾钠的热水溶液中，再加结晶酚和亚硫酸钠，搅拌溶解；冷却后加蒸馏水定容，制得3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用；

③分别取不同体积的3-羟基丁酮标准溶液置于比色管，各比色管中加入相同体积的3,5-二硝基水杨酸试剂，加入蒸馏水使各比色管中液体体积相同；

④各比色管摇匀后在沸水浴中加热至反应完毕，取出后冷却至室温，稀释后，测定各比色管中溶液的吸光度，并绘制标准曲线；

2）含3-羟基丁酮的发酵液耗尽葡萄糖后，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，并与发酵液共沸，反应完毕后，检测溶液吸光度；

3）根据步骤2）检测的吸光度数值以及步骤1）绘制的标准曲线获得发酵液中3-羟基丁酮的浓度。

2.如权利要求1所述发酵液中3-羟基丁酮定量测定的方法，其特征在于：步骤①中3-羟基丁酮标准溶液的浓度为0.005-0.02mol/L。

3.如权利要求1所述发酵液中3-羟基丁酮定量测定的方法，其特征在于：步骤②3,5-二硝基水杨酸试剂中，3,5-二硝基水杨酸的浓度为0.015-0.04mol/L，氢氧化钠的浓度为0.3-0.6mol/L，酒石酸钾钠的浓度为0.4-0.8mol/L，结晶酚的浓度为0.03-0.06mol/L，亚硫酸钠的浓度为0.02-0.05 mol/L。

4.如权利要求1或3所述发酵液中3-羟基丁酮定量测定的方法，其特征在于：步骤③中，分别取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL 3-羟基丁酮标准溶液，并分别置于0-6号比色管中；向0-6号比色管中均加入1.5mL 3,5-二硝基水杨酸试剂；向0-6号比色管中加入蒸馏水，使得0-6号比色管中溶液体积均为3.5mL。

5.如权利要求1所述发酵液中3-羟基丁酮定量测定的方法，其特征在于：步骤④中，在540nm波长下测定吸光度。

6.如权利要求1所述发酵液中3-羟基丁酮定量测定的方法，其特征在于：步骤2）中，发酵液中3-羟基丁酮的浓度稀释至0.08mg/mL以下。