[发明专利]一种分步高效制备海参内脏抗氧化肽的制备方法

说明书

本发明涉及多肽领域，具体涉及一种分步高效制备海参内脏抗氧化肽的制备方法，具体包括：S1：将海参内脏经预处理成海参匀浆；S2：将S1中的海参匀浆加入蛋白酶第一次酶解，酶解后离心分离得沉淀和上清液，将上清液经膜分离成第一小分子多肽溶液和大分子多肽溶液；S3：将S2中得到的沉淀和大分子多肽溶液混合后加入蛋白酶第二次酶解，酶解后离心收集上清液经膜分离出第二小分子多肽溶液；S4：所述第一小分子多肽溶液和第二小分子多肽溶液经干燥后得到抗氧化肽粉。本发明方法制备海参内脏抗氧化肽，具有较高的得率。

技术领域

本发明涉及多肽领域，具体涉及一种分步高效制备海参内脏抗氧化肽的制备方法。

背景技术

海参为属海参纲(Holothuroidea)的海洋棘皮动物，广布于世界各海洋。海参同人参、燕窝、鱼翅齐名，是世界八大珍品之一，其不仅可作为食品也是名贵的药材。据《本草纲目拾遗》中记载：海参，味甘咸，补肾，益精髓，摄小便，壮阳疗痿，其性温补，足敌人参，故名海参。海参具有提高记忆力、延缓性腺衰老，防止动脉硬化以及抗肿瘤等作用。

在海参食用方面，人们通常以海参体壁为食，而海参内脏则做废弃物处理。但是海参内脏中含有与体壁相似的蛋白质、氨基酸、多糖、脂肪酸、海参皂苷等成分外,还富含色素、微量元素、酶和有益菌等多种活性组分,因此海参内脏不仅具有增强免疫力、抗氧化、抗疲劳、抗癌、抗肿瘤等作用,还具有降血糖、降血脂、滋阴养血、补肾益精等功效。其中，海参内脏中丰富的蛋白质可为蛋白质食品的制备提供廉价优良蛋白源。

抗氧化肽多是由2-10个氨基酸通过肽键连接成的寡肽，并具有合适的亲水-疏水比例。主要通过向抗氧化酶提供氢、缓冲生理pH、捕捉自由基和螯合金属离子等途径起到抗氧化作用。现已从大豆、乳清、玉米、草鱼、鲨鱼皮等动植物蛋白源中制备出活性较强的抗氧化肽。与传统天然抗氧化剂V_C、V_E相比，具有更强的抗氧化持续性、稳定性。对于衰老、疾病或不健康状态所产生过量的超氧阴离子、羟自由基等，通过摄入抗氧化肽可减少这些自由基的攻击。研究表明，抗氧化肽常与其它生物活性有一定的相关性，包括免疫调节、抗肿瘤、降胆固醇等，在制药领域中，抗氧化肽常作为生物药品的佐剂，为药物的体内作用机制提供多靶向位点，克服了某些单靶向药物稳定性差、作用期内复发率高等缺点。

在抗氧化肽制备方面，酶解被认为是最高效且具有专一性的制备方法之一。酶解过程是一个微观过程，其效率受到底物性质影响，如蛋白质空间结构，蛋白质基团暴露情况，蛋白质酶解结合位点等。因此，蛋白酶的酶解工艺参数是影响影响抗氧化肽活性最重要因素之一，水解度(DH％)通常用来衡量蛋白酶的酶解效率，蛋白酶具有较强的特异性，能专一地切断特定的肽健，在制备生物活性肽过程中，常用的蛋白酶有胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、Alcalase、Flavourzyme和Protamex等。同时，由于蛋白质分子分子量大小、空间结构等方面的多样性，导致经蛋白酶酶解后的抗氧化肽组分具有很高的复杂性。因此，需要对肽进行分离筛选，常用的分离筛选方法有超滤分离技术，离子交换层析，凝胶过滤层析，反向高效液相色谱。

蛋白质在正常情况下呈大分子状态，且具有一定的聚合度及空间结构，这使得蛋白酶的转移及结合受到影响，进而降低酶解效率。较弱的物理作用力辅助有利于蛋白质形成更加松散的结构有利于酶的结合，较强的物理作用力甚至可直接将大分子击碎形成小分子。以超声波为例，其具有空化作用，且产生的气泡经挤压破裂，可以在瞬间产生较强的机械剪切力，使蛋白质降解，或者使蛋白质构象改变，促使其亲水基团暴露出来的更多，从而提高蛋白质的水解度，利于蛋白质底物和酶结合，最终提高酶解效率。而高压微射流是一种特殊形式的超高压均质。它是集输送、混合、超微粉碎、加压和膨化等多种单元操作于一体的全新技术。主要适用于流体混合物料的剪切、破碎、均质和膨化，物料在压力的推动下瞬时通过，压力变化速率极大，能产生巨大的压力降，同时物料通过处理腔时受到剪切、粉碎等机械力的复合作用，使物料得到超微粉碎。现有涉及物理法及酶法结合的酶解技术中往往仅对底物进行一次物理作用及酶解，其中有很大一部分未酶解资源仍做废弃物丢弃。故在抗氧化肽的制备上，可通过物理法及酶法结合的分步制备方法进行抗氧化肽的制备。