[发明专利]一种调控青钱柳悬浮细胞多糖含量增加的方法

说明书

本发明研究了一种调控青钱柳悬浮细胞多糖含量增加的方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养、稀土调控青钱柳试管苗多糖的含量等步骤，本发明方法所制备的青钱柳悬浮细胞生长好，代谢物质多糖的含量高。本发明方法利用稀土对青钱柳悬浮细胞进行有目的的调控，可以在短期内获得大量多糖含量高的青钱柳细胞，获得大量的制药原料，并能有效降低生产成本，益于进行工业化生产。

技术领域

本发明涉及稀土调控青钱柳悬浮细胞多糖含量增加的方法。

背景技术

青钱柳别名：摇钱树、麻柳，青钱李、山麻柳、山化树。胡桃科、青钱柳属植物，我国南方多省均有发现，多以零星分布。青钱柳乃冰川四纪幸存下来的珍稀树种，仅存于中国。青钱柳被誉为植物界的大熊猫，继心脑血管、癌症、肿瘤之后，高血糖现已成为人类的第二大杀手，这时人们发现了青钱柳，并将其芽叶炮制成青钱柳茶。青钱柳茶富含丰富的皂苷、黄酮、多糖等有机营养成分，能够有效平衡人体糖代谢，从而达到降血糖，逆转并发症的养生效果。

青钱柳复合茶含有大量的铁、锌、硒、铬、锗、镁、钙等无机营养成分，还含有锰、铁、铜、铬、锌、硒、钒、锗等微量元素，与糖代谢和胰岛素作用密切相关的元素Ni、Cr、V、Se的含量较高，能够协助胰岛素发挥降血糖作用，并能改善糖耐量。

四十岁以上的体胖人群；有糖尿病家族史人群；曾经血糖过高的人群。30岁以上的妊娠妇女，曾经分娩巨大婴儿者；高血糖伴有血压、血脂异常人群；高尿酸、高血粘、高胰岛素中有其中两个的人群；常年不参加体力劳动人群；体弱多病，免疫力低下人群。

《中国中药资源志要》记载，青钱柳叶具清热消渴解毒之效。《全国中草药名鉴》 记载：青钱柳树皮、叶、根有杀虫止痒，消炎止痛祛风之功效。中医临床用于治疗糖尿病 因其有药理作用能明显降低血糖、减脂肪和尿糖。医学研究发现，青钱柳芽叶含有一条神奇的原生态降糖因子链，主要由两大原生态营养成分组成：无机营养成分跟有机营养成分，能够有效全面的调节人体糖代谢。

镧是17种稀土元素中最重要和最活泼的元素，适当浓度La³⁺对幼苗的生长起积极作用，研究表明La³⁺与Ca²⁺的半径相似，化学性质上可能存在着竞争作用。La³⁺和Ca²⁺的作用相似，能够取代Ca²⁺在细胞膜上的位置，并在一定的条件下产生与Ca²⁺相似的作用。可以提高蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性，可以作为植物光合作用的催化剂，促进植株的生长，提高幼苗干重。近年来的研究发现稀土亦具有抗寒、抗旱等抗胁迫的能力，试验证明稀土元素能促进植物细胞培养中次级代谢产物的积累，稀土元素能提高植物细胞中次级代谢产物的含量可能与它们影响多种酶的活性有关。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供青钱柳悬浮培养的快速繁殖方法，并通过稀土对其进行调控获得生长良好，多糖含量高的细胞，进行工业大规模生产，可以规模化的为药厂提供青钱柳多糖的来源。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

野外生长的青钱柳叶片，在MS培养基上，附加激素NAA 1mg/L，IBA 2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6g/L，诱导愈伤组织，诱导30天，继代4-5次，继代周期20天，取继代后的嫩绿松散的愈伤组织，加入White+TDZ1mg/l+IAA0.5mg/l，进行悬浮细胞培养，继代3次后，在培养基中加入2mg/l稀土，进行细胞多糖含量的调控，取样后采用水提法提取青钱柳多糖含量，提取时间为7.5 h，料液比为1：20，pH为8.5，使用树脂吸附法对多糖进行纯化。D₃₀₁R树脂对青钱柳多糖吸附量大，氯化钠洗脱效果最好，使用苯酚-硫酸法对纯化后的多糖进行检测，多糖得率28%。

所述培养基消毒方式为在121℃下灭菌20min。