[发明专利]一种血小板膜包裹载药多孔纳米颗粒及其制备方法

权利要求书

1.一种血小板膜包裹载药多孔纳米颗粒，其特征在于，通过壳寡糖CS修饰PLGA后载蟾毒灵Bufalin，然后被血小板膜包裹得到。

2.一种血小板膜包裹载药多孔纳米颗粒的制备方法，包括：

(1)将PLGA加到含有EDC·HCl和NHS的溶液中活化，加入壳寡糖CS，氮气气氛下反应，透析，冷冻干燥，得到壳寡糖修饰的PLGA，其中，PLGA、EDC·HCl和NHS的摩尔比为1:2-4:2-4，CS与PLGA的摩尔比为1:1-2:1；

(2)将步骤(1)中壳寡糖修饰的PLGA和蟾毒灵Bufalin以质量比为5:1-15:1溶解于溶剂中，搅拌下加入到TPGS水溶液中，在空气中搅拌反应后，烘干溶剂，离心，用去离子水重悬，得到载有Bufalin的多孔纳米颗粒CS-pPLGA/Bu NPs；其中壳寡糖修饰的PLGA与TPGS的质量比为1:1-10:1，壳寡糖修饰的PLGA与溶剂的比例为1-15mg:0.8-3mL；

(3)通过大鼠心脏取血，获得新鲜血液，通过梯度离心的方法提取血小板，提取的血小板经过冷冻-融化循环得到中空的血小板，再经超声，得到血小板膜碎片；

(4)将步骤(2)中CS-pPLGA/Bu NPs与步骤(3)中血小板膜碎片混合，超声、挤压，得到血小板膜包裹载药多孔纳米颗粒PLTM-CS-pPLGA/Bu NPs，其中CS-pPLGA/Bu NPs与步骤(3)中血液的比例为3-5mg:4-6mL。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中含有EDC·HCl和NHS的溶液的溶剂为二甲基甲酰胺；活化温度为-5-5℃，活化时间为0.3h-1h。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中加入水溶性壳寡糖CS是在升温至室温下进行的；反应时间为45-50h。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中溶剂为丙酮；溶剂与TPGS水溶液的体积比为1:6-1:4；搅拌反应温度为室温，搅拌反应时间为2-4h。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中搅拌速度为600-1000rpm；离心速度为7000-9000rpm，离心重复3次。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中梯度离心的方法具体为：将抗凝血加到含有分离液的离心管中于250-300g下离心10-20min，吸取第一层血小板血浆加到另一个离心管中，加入PBS洗涤三次，得到血小板，其中抗凝血与分离液的体积比为1:2。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中血小板膜碎片于含有蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中保存，其中蛋白酶抑制剂的浓度为2mM。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中超声的工艺参数为：功率为80-120w，频率为30-50KHz，时间为4-6min。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中挤压是用孔径为200nm的滤膜。